C型肝炎ウイルス複製に対する脂肪沈着、およびアディポサイトカインの作用

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20590475
• Research Institution: University of the Ryukyus
• Principal Investigator: 山城 剛 University of the Ryukyus, 医学部附属病院, 講師 (80468074)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / アディポサイトカイン / HCVレプリコン

Research Abstract

HCVレプリコンシステムの開発により人肝細胞由来の培養細胞内でHCVモデルウイルスを増殖させることが可能となった。同システムを用い、アディポサイトカインのHCV複製への影響の検討を行った。HCVレプリコンシステム:HCV全長遺伝子から構造蛋白領域を欠失させ、代わりにNeomycin耐性遺伝子を挿入したsubgenomic RNAである。このsubgenomic RNAを肝癌由来の細胞株であるHuh-7細胞に遺伝子導入し,G418存在下で培養することにより選択的にレプリコンRNAが自律複製する細胞株(レプリコン細胞Huh7/feo)を得ることができる。今回の実験で用いたのはホタルluciferaseとNeomycin耐性遺伝子の融合遺伝子を発現するレプリコン細胞であり,luciferine量を定量することにより簡便かつ正確にHCV-RNA量を定量、評価することが可能(Toma S, Yamashiro T et al., J Viral Hepat. 2009)。HCVレプリコン細胞ヘアディポサイトカイン(アディポネクチン、レプチン、レジスチン、MCP-1,IL-6)を投与し、HCVレプリコン複製に対する経時的影響(Oh、24h、48h、72h後)についてルシフェラーゼアッセイを行った。結果:今年度使用したHuh7細胞内レプリコンの増殖は不安定で研究結果に再現性がとれず、評価不能であった。今年度は東京医科歯科大学消化器内科坂本直哉先生より提供されたHuh7.5.1/feo細胞(新たに開発されたレプリコン細胞でHCVが安定的に増殖)を用いて再実験を行う予定である。