2008 Fiscal Year Annual Research Report
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20591004
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
木村 円 Kumamoto University, 医学部附属病院, 助教 (60433025)
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| Keywords | 幹細胞 / 神経筋疾患 / 筋ジストロフィー / 遺伝子治療 / 移植・再生医療 |
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| Research Abstract |
本研究は“神経筋難病の幹細胞/遺伝子治療法の開発"を大目標として掲げている。具体的には難病・筋ジストロフィーをターゲットに定め、病的骨格筋に治療用蛋白質"dystrophin"を導入する(replacement therapy)ことである。1)まず治療研究に用いるウイルスベクターの作成及びその機能確認をおこなった。特にマーカー遺伝子(LacZ,eGFP)、複数の短縮型dystophinとdystrophin/eGFP fusion遺伝子、骨格筋への特異的分化誘導を促す因子(MyoD,Pax7など)を発現カセットにサブクローンを終了し、シーケンシング、HEK293細胞等に導入し、FACS、western blotting、免疫染色で確認した。2)一部はすでにLentivirus vector作成用カセットに挿入し、ベクターを作成、CMV,RSV,CAGなどの非特異的プロモーター以外に、骨格筋特異的なHuman Skeletal α-actin gene promoter (HSA),CK6(modified Creatinin Kinase promoter6),CK7を用いた。マーカー遺伝子及び、短縮型dystrophinとdystrophin/eGFP fusion遺伝子、MyoD,Pax7の発現をHEK293細胞などの哺乳動物細胞で確認した。3)調節型myoDをマウス由来線維芽細胞に導入し、ex vivoおよびin vivoで骨格筋への分化誘導を行い、mdxマウスへの短縮型dystropin遺伝子導入に成功した。さらに効率を改善するため検討を続けている。4)直接、モデル動物(mdxマウス)に直接筋注した。治療効果の判定を行っている。特に生理学的評価として骨格筋の収縮性・耐性の評価としてspecific forceとcontractionに対する耐性試験、一部の個体について呼吸機能評価を行った。
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