2009 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子治療による次世代血友病治療法の開発と非ヒト霊長類を用いた前臨床研究
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20591155
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| Research Institution | Jichi Medical University |
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Principal Investigator |
三室 淳 Jichi Medical University, 医学部, 准教授 (10221607)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
窓岩 清治 自治医科大学, 医学部, 講師 (70296119)
大森 司 自治医科大学, 医学部, 講師 (70382843)
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| Keywords | 血友病 / 遺伝子治療 / 細胞移植 / 第VIII因子 / 第IX |
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| Research Abstract |
血友病A遺伝子治療:In vivoへのベクターの直接投与には染色体への組み込みがほとんどおこらないAAVベクターを用い、ex vivoにて細胞へ遺伝子導入し再移植するときには染色体への組み込みが必要であるためSIVベクターを用いることとしている。これまで、血友病イヌでの検討を視野に入れ、種々のプロモーターの下流にイヌFVIII遺伝子を搭載したベクターを作製し、血友病Aマウスで発現を検討したところ、AAV8ベクターと強力な肝臓特異的なHCRHAAT-プロモーターを用い肝臓に限定してイヌFVIIIを発現させることで、イヌFVIII活性を免疫抑制なしに正常イヌFVIII活性の100%以上に保つことができた。一方、ヒトFVIIIはマウスにおける血液半減期が極めて短く血液レベルを高めることがこれまで困難であったが、AAV8ベクターとHCRHAAT-プロモーターを用いることで血友病AマウスにおいてヒトFVIII活性を50-100%に維持することが可能となった。血友病B遺伝子治療:ヒトFIX特異的モノクロナル抗体で検出可能な変異カニクイザルFIX(FIXT262A:262位のThrをAlaに置換)を発現するAAV1ベクターを3頭のカニクイザル骨格筋に投与することで変異カニクイザルFIXの血液レベルを4-40%で長期間維持することが可能であった。マウスで1000%以上のFIX発現をえることができるAAV8ベクターをサルに末梢静脈あるいは腸間膜静脈枝から投与したところ、中和抗体陰性の3頭では治療レベルの導入遺伝子由来FIX発現が得られた。しかし、サルに既感染に基づくAAV8に対する中和抗体が低力価でも存在するサル4頭では血中に期待レベルのFIXの長期発現は得られなかった。
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