2009 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト臍帯血由来培養好塩基球の機能と細胞内シグナル伝達に関する研究
| Project/Area Number |
20591183
|
|---|
| Research Institution | Gunma University |
|---|
Principal Investigator |
石塚 全 Gunma University, 大学院・医学系研究科, 講師 (50302477)
|
|---|
| Keywords | 好塩基球 / 臍帯血 / CD34 / サイトカイン / IgE / IL-4 / IL-8 |
|---|
| Research Abstract |
ヒト臍帯血単核球よりIL-3存在下に培養して得られた細胞および、さらにこの細胞をBasophil isolation kit IIを用いてnegative selectionした培養好塩基球のIgE Fcレセプターの発現をフローサイトメトリーにより解析した。細胞をヒトIgEと2時間インキュベーション後洗浄し、FITC標識抗ヒトIgEモノクローナル抗体を用いて、細胞表面に結合したIgEを検出する方法を用いた。ヒト末梢血単核球からBasophil isolation kit IIで分離した末梢血好塩基球に比べて、単核球由来培養好塩基球のIgE Fcレセプターの発現レベル(蛍光強度)は低かった。この細胞をヒトIgEで受動感作後、至適濃度(1μg/ml)の抗ヒトIgE抗体で刺激すると、有意なIL-8産生が確認されることより、発現レベルが低いながらも単核球由来培養好塩基球にはIgE Fcレセプターが存在すると予想された。しかしながら、IgEを介する細胞内シグナル伝達やIL-4産生を研究するうえでは若干問題であると思われた。そこでヒト臍帯血GD34+細胞をIL-3存在下で培養することとし、さらにIgE Fcレセプターの発現を増加させるために、ヒトIgE(500ng/ml)を培養液に添加して培養し、添加しない場合と比較した。その結果、GD34+細胞から培養した細胞では単核球から培養した細胞よりも、若干IgE Fcレセプターの発現が増加したが、IgEを添加して培養することにより、IgE Fcレセプターの発現レベルは著明に増加した。さらに、CD34+細胞からIgE存在下に培養した好塩基球では、IgE非存在下に培養して得られた好塩基球と比較して、抗ヒトIgE抗体で刺激した際に産生されるIL-4の量が約3倍に増強され、IL-4産生機構の研究により適したモデル細胞となることが確認された。
|
