経皮的血管形成術後の血栓閉塞に対する局所遺伝子導入の検討

2008 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20591481
• Research Institution: University of Miyazaki
• Principal Investigator: 田村 正三 University of Miyazaki, 医学部, 教授 (60150439)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 矢野 貴徳 宮崎大学, 医学部, 講師 (20315378) ; 畠山 金太 宮崎大学, 医学部, 講師 (60325735) ; 山下 篤 宮崎大学, 医学部, 助教 (90372797)
• Keywords: 血栓 / 遺伝子 / ADAMTS13 / 循環器・高血圧

Research Abstract

〈研究目的〉
経皮的血管形成術後の血栓性閉塞の予防目的として種々の抗血栓、抗凝固薬が使用されているが、出血等の合併症のため、継続的に使用できない場合も多い。局所での遺伝子導入はこの問題を克服できる可能性を有しており、本研究では2種類の酵素の局所遺伝子導入による抗血栓作用を検討する。
<研究内容と結果>
1)遺伝子組換えベクターの作製
本研究では、血小板凝集に関する酵素、Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolaseおよびADAMTS13の組換えアデノウイルスベクターを新たに作成した。
2)培養細胞への導入実験
作製した遺伝子組換えベクターによる遺伝子導入効率を培養細胞にて検討した。培養細胞にはヒト血管平滑筋細胞を使用した。この細胞に対し、組換えアデノウイルスにて遺伝子を導入した結果、持続的に目的血管壁細胞にて目的蛋白が発現することを確認した。
3)動物実験モデルの作製、遺伝子導入、評価
動脈硬化性病変モデルは、SDラットの外頚動脈より2フレンチ径のバルーンカテーテルを総頚動脈内に挿入し、内膜を傷害することによって作製した。組換えアデノウイルスベクターを使用し、同血管に遺伝子導入を行ったのち、蛋白発現量、酵素活性測定を行った。この結果遺伝子導入により動脈硬化性病変モデル血管において目的蛋白の持続的発現を確認した。今後この遺伝子導入血管における抗血栓効果を検討する予定である。