2009 Fiscal Year Annual Research Report
変異型p53細胞を標的としたsiRNAによる放射線/温熱/抗がん剤増感の研究
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20591502
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
大西 健 Nara Medical University, 医学部, 准教授 (50152195)
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| Keywords | p53 / 増感 / RNA干渉 / siRNA / シグナル伝達因子 / AKT |
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| Research Abstract |
NBSI標的siRNA (NBS1-siRNA)およびXIAP的siRNA (XIAP-siRNA)は非小細胞肺がん細胞(H1299)の放射線感受性を高めることをこれまでに明らかにした。興味深いことにこれらのsiRNAによる放射線増感効果は変異型p53を導入したH1299細胞(H1299/mp53)の方が正常型p53を導入したH1299細胞(H1299/wtp53)よりも顕著であった。この結果は変異型p53細胞優位な放射線増感を得るには細胞生存シグナル伝達因子の発現を抑制することが有効な手段であることを示唆している。本年度は、この変異型p53細胞優位な放射線増感放射線のメカニズムを調べるため、放射線によって誘導される細胞生存シグナル伝達因子の発現がp53依存的に抑制されるかを検討した。p53タンパク質と細胞生存シグナル伝達の中心的な役割を果たしているAKTタンパク質とのタンパク結合について免疫沈降法を用いて調べた。
1. H1299/wtp53細胞、H1299/mp53細胞およびH1299/neo細胞にX線(3Gy)照射後、細胞より抽出した全タンパク質をリン酸化p53抗体で免疫沈降した後、Western blotを行った。その結果、H1299/wtp53細胞とH1299/mp53細胞においてAKT抗体認識バンドがX線照射前後で検出された。
2. X線照射後ではAKTバンドはやや上方にシフトしたため、AKTのリン酸化が示唆された。
3. AKT活性を調べたところ、H1299/wtp53細胞の方がH1299/mp53細胞よりも低かった。
4. 以上の結果から、リン酸化p53とAKTは細胞内で結合していること、正常型p53はAKT活性を抑制していること、さらに、これらがXIAP標的siRNAによる変異型p53細胞優位な放射線増感の要因であると示唆された。
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