ポロソームに焦点をあてた分泌機構抑制による機能性下垂体腺腫の新しい治療法の確立

2009 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20591723
• Research Institution: Teikyo University
• Principal Investigator: 松野 彰 Teikyo University, 医学部, 教授 (00242058)
• Keywords: EYFP-GH / porosome / VAMP / fodrin

Research Abstract

我々がさきに確立したEYFPとGHとの融合蛋白(EYFP-GH)の遺伝子を発現する、ラット由来の下垂体培養細胞のstable cell line(GH3 cellとAtT-20 cell)を本年度も実験に使用した。porosomeの分泌顆粒側の構成因子であるVAMPと介在分子であるfodrinに焦点をあて、VAMPとECFPの融合蛋白、およびfodrinとEGFPの融合蛋白を強制発現させた。ラットVAMPのcDNAについてはラット下垂体組織よりmRNAを抽出し、RT-PCRにより作製した。VAMPのcDNAに対して制限酵素サイトをPCRに付加し組換えを行い、ECFPと融合させた。このVAMPとECFPの融合蛋白の組換え遺伝子を、EYFP-GHの遺伝子を発現する、ラット由来の下垂体培養細胞のstable cell line(GH3 cellとAtT-20 cell)に導入した。トランスフェクションは、Trans ITTMなどを用いて行った。ECFP-VAMP、EGFP-fodrin、およびこれら2者を同時にトランスフェクションしたのちに、分泌刺激(GH3にはTRH, high K, AtT-20にはhigh K, CRH)を加え、GHの分泌過程、分泌顆粒が発芽し分泌をおこす際に、ECFP-VAMP、EGFP-fodrinが作用している像を、real-timeに観察した。観察は、共焦点レーザー顕微鏡のほかに、二光子顕微鏡を用いて、細胞膜直下の分泌を観察した。その結果、これらの分子がporosomeの形成機構とGHの分泌に必須であることを確認した。

Research Products

• [Journal Article] Oral administration of cilnidipine to patients with hypertensive intracerebral hemorrhage in anacute stage : significance and role_of an N-type calcium channel blocker (2009)
  • Author(s): Matsuno A, Ide F, Tanaka H, Asano S, Miyawaki S, Uno T, Tanaka, J, Nakaguchi H, Sasaki M, Murakami M, Fuke N
  • Journal Title: Ir J Med Sci 178 Pages: 419-422
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Preoperative elevated serum growth hormone is preventive of osteonenia in postsurgical patients with pituitary somatotroph adenomas : comparison with clinically non-functioning adenomas (2009)
  • Author(s): Sasaki M, Okazaki R, Inoue D, Nakashima, M, Ide F, Nakaguchi H, Yamada SM, Hoya K, Murakami M, Mizutani A, Okinaga H, Matsuno A
  • Journal Title: Endocrinologist 19 Pages: 208-210
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Analyses of factors_influencing the acute effect of octreotide in growth hormone-secreting adenomas (2009)
  • Author(s): Nakashima M, Takano K, Matsuno A
  • Journal Title: Endocr J 56 Pages: 295-304
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Temozolomide is not effective for recurrent pituitary carcinoma transformed from atypical a denoma (2009)
  • Author(s): Matsuno A, Murakami M, Mizutani, A, Asano S, Ishida Y, Yamazaki K, Okinaga H
  • Organizer: The 9th China-Japan Joint Seminar on Histochemistry and Cytochemistry
  • Place of Presentation: Nannng, China
  • Year and Date: 2009-11-05
• [Presentation] Temozolomide is not effective for recurrent pituitary carcinoma transformed from atypical adenoma (2009)
  • Author(s): Matsuno A, Murakami M, Mizutani, A, Asano S, Ishida Y, Okinaga H
  • Organizer: The 11th International Pituitary Pathology Society (IPPS) Meeting
  • Place of Presentation: Awaji, Japan
  • Year and Date: 2009-10-19