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2008 Fiscal Year Annual Research Report

動物実験によるβ3インテグリン組み換え型培養表皮の有効性の検証

Research Project

Project/Area Number 20592112
Research InstitutionKawasaki Medical School

Principal Investigator

久保 美代子  Kawasaki Medical School, 医学部, 講師 (00098609)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 森口 隆彦  川崎医科大学, 医学部, 教授 (10111816)
Keywords移植・再生医療 / 培養表皮 / 動物実験
Research Abstract

1. β3インテグリン・サブユニットcDNA導入ヒトケラチノサイトを作製した.
レトロウイルスベクター法によりβ3インテグリン・サブユニットcDNAを正常ヒトケラチノサイトに導入した.具体的には,高力価β3-組み換えレトロウイルスのproducer cells(米国ですでにクローニングをし,凍結保存してある)を培養し,その上清中のβ3-組み換えレトロウイルスを正常ヒトケラチノサイト(Cascade社)に感染させた.培地はEpiLife+growth factor(Cascade社)を用いた.Subconfluentの状態で同ケラチノサイトを凍結保存した.凍結保存したケラチノサイトを培養して,αvβ3の蛋白発現を蛍光抗体法ならびにFACSにより確認した後,cell sortingによりαvβ3発現陽性細胞のenrichmentを行った.そしてそれらをさらに増殖させた後,再び凍結保存した.平均84%のαvβ3発現陽性率を得た.コントロール細胞として,同様方法によりβ-galactosidase cDNA導入ヒトケラチノサイトを作製した.
2. I型コラーゲン膜を使用してβ3インテグリン組み換え型培養表皮を作製した.
市販のI型コラーゲン膜上でβ3インテグリン・サブユニットcDNA導入ヒトケラチノサイト(コントロール細胞として,β-galactosidase cDNA導入ヒトケラチノサイトを用いた)を培養して培養表皮を作製した.I型コラーゲン膜として,豚由来コラーゲン膜(ペルナック^<[○!R]>)と細胞培養用透過性コラーゲン膜(AteloCell^<[○!R]>)とを比較した.その結果,AteloCell^<[○!R]>のほうが正確な細胞数を使用でき,均一な培養表皮を作製することができた.

  • Research Products

    (3 results)

All 2009 2008

All Presentation (3 results)

  • [Presentation] 褥瘡では熱傷に比べて真皮内の種々の部位でフィブロネクチン分布が減少する2009

    • Author(s)
      久保美代子,森口隆彦
    • Organizer
      第1回日本創傷外科学会
    • Place of Presentation
      東京都
    • Year and Date
      2009-01-17
  • [Presentation] Basic fibroblast growth factor increases cell growth of normal human keratinocytes and fibroblasts in extracellular matrix- and dose-dependent manners.2008

    • Author(s)
      Miyoko Kubo, Takahiko Moriguchi
    • Organizer
      The Third World Union of Wound Healing Societies' Meeting
    • Place of Presentation
      Toronto, Canada
    • Year and Date
      20080604-20080608
  • [Presentation] ヒトケラチノサイト, 線維芽細胞のin vitroでの細胞増殖に対するbFGFの効果-フィブラストスプレーとbFGF 原末との比較-2008

    • Author(s)
      久保美代子, 森口隆彦
    • Organizer
      第6回bFGF創傷治癒研究会
    • Place of Presentation
      東京都
    • Year and Date
      2008-10-24

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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