2008 Fiscal Year Annual Research Report
CCNファミリー2/CTGFによる破骨細胞形成促進作用の分子メカニズムの解明
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20592173
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
西田 崇 Okayama University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (30322233)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
滝川 正春 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (20112063)
久保田 聡 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (90221936)
服部 高子 岡山大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (00228488)
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| Keywords | CCN2 / CTGF / RANKL / DC-STAMP / 破骨細胞形成 / 内軟骨性骨化 / RAW264.7細胞 / CCN2欠損マウス |
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| Research Abstract |
CCNファミリー2/結合組織成長因子(CCN2/CTGF:CCN2)は軟骨細胞の増殖・分化を促進するだけでなく、骨芽細胞や血管内皮細胞の増殖・分化・遊走をも促進する成長因子であり、内軟骨性骨化において非常に重要な成長因子であるが、内軟骨性骨化の最終局面での軟骨基質の吸収に対するCCN2の作用は未だ解明されていない。CCN2欠損マウスの成長板では肥大軟骨細胞層が増大しており、この所見は軟骨基質を吸収する破骨細胞形成に障害が起こっていることを示唆している。そこで、平成20年度における本申請課題では主に破骨細胞形成におけるCCN2の役割をin vitro系を中心に解析し、以下の実験結果を得た。
1.マウスマクロファージ系細胞株RAW264.7にGST融合RNAKL(GST-RANKL)を6日間作用させて破骨細胞を誘導すると、CCN2の遺伝子発現レベルは分化前の細胞よりも分化後の細胞で上昇した。
2.GST-RANKLと組換えCCN2タンパク質(rCCN2)を同時に添加して破骨細胞を誘導すると、GST-RANKL単独で誘導するよりも破骨細胞のマーカーである洒石酸抵抗性酸ホスファターゼ(Trap)で染色される3核以上の多核巨細胞数は増加した。また、Trapの遺伝子発現量の増加も見られた。
3.細胞融合に関与するDendritic cell-specific transmembrane protein(DC-STAMP)の遺伝子発現量はGST-RANKL単独添加群よりもrCCN2とGST-RANKL同時添加群で増加した。
4.DC-STAMPとCCN2が共局在することを蛍光免疫染色法で明らかにすると共に両分子が直接結合することを固相下結合実験法によって確認した。
以上の結果からCCN2はDC-STAMPと結合し、細胞融合を促進することで破骨細胞形成を促進する可能性が考えられた。
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