2008 Fiscal Year Annual Research Report
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20658003
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
村田 稔 Okayama University, 資源生物科学研究所, 教授 (20166292)
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| Keywords | 複製起点 / シロイヌナズナ / イネ / ORC / GFP / LoxP / 分子育種 / DNA |
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| Research Abstract |
本研究では、モデル植物であるイネおよびシロイヌナズナにおいて、核ゲノム中に散在する複製起点を単離、解析し、分子育種への応用を図ることを目的としている。そこで、まずシロイヌナズナから、DNAの複製起点を単離するため、ゲノム中に2つのLoxP配列をもつ個体の作成と選抜を行った。シロイヌナズナでは、すでに2つのLoxPサイトが導入され、その1つがDsによって挟まれている系統が作成されているため、いくつかの系統をABRCより得た。得られた形質転換体と、Ac由来のトランスポゼース(転移酵素)遺伝子を導入した個体とを交配し、そのF1種子を得た。これを自殖し、ハイグロマイシン培地で選抜したところ、Dsで挟まれたLoxPが転移し、ハイグロマイシン耐性を示す個体が現れた。現在このような個体と、Creリコンビナーゼ遺伝子が導入された個体との交配を進めており、次世代では、Creリコンビナーゼによって、2つのLoxPサイト間の組換えが誘発され、環状のDNA分子(染色体)が形成されることが期待される。
これとは別に、シロイヌナズナにおいて、複製起点に形成される複合体ORC(Origin Recognition Complex)のサブユニット(ORC1〜6)をコードするcDNAをすべてクローン化した。このうちORC4は、DNAに直接結合することが報告されており、今回、GFPと融合させたAtORC4を、シロイヌナズナの培養細胞に導入したところ、多数の散在型シグナルが観察された。現在、これら培養細胞から、AtORC4と特異的に結合しているDNAの単離、同定を試みている。
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