2008 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子改変動物による下垂体後葉ホルモン放出機構の可視化と生理機能解明
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20659035
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Exploratory Research
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| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
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Principal Investigator |
上田 陽一 University of Occupational and Environmental Health, Japan, 医学部, 教授 (10232745)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤原 広明 産業医科大学, 医学部, 助教 (10369051)
横山 徹 産業医科大学, 医学部, 助教 (80425321)
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| Keywords | シナプス小胞 / バゾプレッシン / オキシトシン / イメージング / 遺伝子改変ラット |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、(1)下垂体後葉ホルモンであるバゾプレッシンおよびオキシトシンの分泌動態を可視化すること、(2)in vivoでの分泌動態を生細胞でリアルタイムに観察する技術を開発すること、である。バゾプレッシン遺伝子に緑色蛍光タンパク(eGFP)遺伝子を挿入した融合遺伝子を用いて作出したトランスジェニックラットではバゾプレッシンを産生する視床下部神経分泌ニューロンを蛍光顕微鏡下で緑色蛍光により同定することができる。また、オキシトシン遺伝子に青色蛍光タンパク(eCFP)遺伝子を挿入した融合遺伝子を用いて作出したトランスジェニックラットではオキシトシンを産生する視床下部神経分泌ニューロンを蛍光顕微鏡下で緑色蛍光により同定することができる。今年度は、(1)バゾプレッシンおよびオキシトシンを含むシナプス小胞(分泌顆粒)の膜表面タンパクの一つであるシナプトフィジン遺伝子に赤色蛍光タンパク遺伝子を挿入した融合遺伝子の設計を試みた。(2)バゾプレッシン-eGFPトランスジェニックラットおよびオキシトシン-eCFPトランスジェニックラットの繁殖および系統維持は順調に経過している。これらのトランスジェニックラットから得られた神経分泌ニューロンおよび下垂体後葉を用いて、種々の刺激(高カリウム溶液やペプチド)後における緑色または青色蛍光強度の変化をリアルタイムでレーザー照射により測定する技術を開発した。一方、神経分泌ニューロンの細胞体や樹状突起からの開口放出を可視化することは現時点の蛍光顕微鏡での解像度では困難であり、今後工夫が必要であることが明らかとなった。
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Research Products
(7 results)
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[Journal Article] Adrenomedullin 2/intermedin-like immunoreactivity in the hypothalamus and brainstem of rats.2008
Author(s)
Hashimoto, H. Kitamura, K. KaWasaki, M. Saito, T. Suzuki, H. Otsubo, H. Ohbuchi, T, Yokoyma. T. Fujihara, H. Takei, Y, Ueta. Y.
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Journal Title
Autonomic Neuroscience : Basic and Clinical 139(1-2)
Pages: 46-54
Peer Reviewed
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[Journal Article] Chronic osmotic stimuli increase salusin-beta-like immunoreactivity in the rat hypothalamo-neurohypophyseal system : possible involvement of salusin-beta on [Ca(2+)](i)increase and neurohypophyseal hormone releaSe from the axon terminals.2008
Author(s)
Saito, T. Dayanithi, G. Saito, J. Onaka, T. Urabe, T, Watanabe, TX. Hashimoto, H. Yokoyama. T. Fujihara. H. Yokota, A. Nishizawa, S. Hirata, Y., Ueta. Y.
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Journal Title
Journal of Neuroendocrinology 20(2)
Pages: 207-219
Peer Reviewed
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[Presentation] Response of arginine vasopressin-enhanced green fluorescent protein fusion gene in the hypothalamus of formalin-induced nociceptive stimulated rats.2008
Author(s)
Suzuki, H. Kawasaki, M. 0hnishi, H, Otsubo, H. Yokoyama, T. Fujihara, H. Dayanithi, G. Murphy, D, Nakamura, T., Ueta. Y.
Organizer
The 3^<rd> Asian Pain Symposium
Place of Presentation
Fukuoka, Japan
Year and Date
20080718-20080719
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