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2009 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子改変動物による下垂体後葉ホルモン放出機構の可視化と生理機能解明

Research Project

Project/Area Number 20659035
Research InstitutionUniversity of Occupational and Environmental Health, Japan

Principal Investigator

上田 陽一  University of Occupational and Environmental Health, Japan, 医学部, 教授 (10232745)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 藤原 広明  産業医科大学, 医学部, 助教 (10369051)
横山 徹  自治医科大学, 医学部, 助教 (80425321)
Keywordsシナプス小胞 / バゾプレッシン / オキシトシン / イメージング / 遺伝子改変ラット
Research Abstract

本研究の目的は、(1)下垂体後葉ホルモン(バゾプレッシンおよびオキシトシン)の分泌動態を可視化すること、(2)in vivoでの分泌動態を生細胞でリアルタイムに観察する技術を開発すること、である。実験には、バゾプレッシンを緑色蛍光タンパク(eGFP)で、オキシトシンを青色蛍光タンパク(eCFP)で標識したトランスジェニックラットを用いた。また、神経活動の指標(分泌動態の指標とも言える)として汎用されているFosタンパクを赤色蛍光タンパク(mRFP)で標識したトランスジェニックラットも用いた。これらのトランスジェニックラットにおいて、1)バゾプレッシンおよびオキシトシンの産生・分泌動態を室傍核・視索上核および下垂体後葉で緑色蛍光もしくは青色蛍光の変化として観察することができた。しかしながら、シナプス小胞レベルでの可視化はできなかった。2)バゾプレッシン-eGFPトランスジェニックの脳室内にコルヒチンを投与して軸索流をブロックすることによりバゾプレッシン産生ニューロンでの緑色蛍光が著明に増強することを観察した。3)バゾプレッシン-eGFPトランスジェニックラットとFos-mRFPトランスジェニックラットの交配によって得られたダブルトランスジェニックラットで、急性浸透圧負荷によって室傍核および視索上核のeGFP陽性細胞(バゾプレッシン産生ニューロン)の細胞質における緑色蛍光の増強(バゾプレッシン産生の増加)とFos-mRFPの発現(神経活動の活性化)を示す赤色蛍光の細胞核が観察できた。4)昨年に引き続き、下垂体後葉における緑色蛍光もしくは青色蛍光強度の変化をリアルタイムで測定する技術の開発・改良を行った。5)視索上核から急性単離後に短期間培養したeGFPもしくはeCFP陽性の神経分泌ニューロンからパッチクランプ法により興奮性および抑制性シナプス入力を記録することができた。

  • Research Products

    (19 results)

All 2010 2009

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (15 results)

  • [Journal Article] Pathophysiological roles of galanin-like peptide in the hypothalamus and posterior pituitary gland.2010

    • Author(s)
      Suzuki, H., et al.
    • Journal Title

      Pathophysiology (Review) 17

      Pages: 135-140

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Specific expression of an oxytocin-enhanced cyan fluorescent protein fusion transgene in the rat hypothalamus and posterior pituitary.2010

    • Author(s)
      Katoh, A., et al.
    • Journal Title

      Journal of Endocrinology 204

      Pages: 275-285

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Induction of the arginine vasopressin-enhanced green fluorescent prote in fusion transgene in the rat locus soerules.2010

    • Author(s)
      Todoroki, M., et al.
    • Journal Title

      Stress (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Robust up-regulation of nuclear red fluorescent-tagged Fos marks neuronal activation in green fluorescent vasopressin neurons after osmotic stimulation in a double transgenic rat.2009

    • Author(s)
      Fujihara, H., et al.
    • Journal Title

      Endocrinology 150(12)

      Pages: 5633-5638

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] The expression of the vasopressin-enhanced green fluorescent protein fusion gene in the hypothalamo-pituitary system in rats : a new aspect of vasopressin dynamics.2010

    • Author(s)
      Ueta, Y.
    • Organizer
      14^<th> International Congress of Endocrinology
    • Place of Presentation
      Kyoto International Conference Center (Kyoto, Japan)
    • Year and Date
      20100326-20100330
  • [Presentation] バゾプレッシン(AVP)-eGFPトランスジェニックラットにおける青斑核での特異的なAVP-eGFPの合成2010

    • Author(s)
      轟美和子
    • Organizer
      第20回日本病態生理学会大会
    • Place of Presentation
      奈良県立医科大学厳橿会館(奈良)
    • Year and Date
      20100123-20100124
  • [Presentation] バゾプレッシンニューロンと浸透圧調節:TRPの関与2009

    • Author(s)
      上田陽一
    • Organizer
      第7回北海道大学脳科学研究教育センターシンポジウム
    • Place of Presentation
      北海道大学学術交流会館(札幌)
    • Year and Date
      20091208-20091209
  • [Presentation] トランスジェニックラットを用いた下垂体後葉ホルモン研究2009

    • Author(s)
      加藤明子
    • Organizer
      第60回西日本生理学会
    • Place of Presentation
      福岡県歯科医師会館(福岡)
    • Year and Date
      20091106-20091107
  • [Presentation] 神経分泌細胞の同定と神経活動のイメージング2009

    • Author(s)
      上田陽一
    • Organizer
      第62回日本自律神経学会総会ワークショップ
    • Place of Presentation
      ダイワロイネットホテル和歌山(和歌山)
    • Year and Date
      20091105-20091106
  • [Presentation] 下垂体後葉ホルモン研究における蛍光タンパクの応用:トランスジェニックラットによる検討2009

    • Author(s)
      加藤明子
    • Organizer
      第50回日本組織細胞化学会
    • Place of Presentation
      ピアザ淡海(滋賀)
    • Year and Date
      20090926-20090927
  • [Presentation] 多色蛍光タンパクを発現するトランスジェニックラットの作出と浸透圧刺激に対する反応2009

    • Author(s)
      藤原広明
    • Organizer
      第50回日本組織細胞化学会
    • Place of Presentation
      ピアザ淡海(滋賀)
    • Year and Date
      20090926-20090927
  • [Presentation] Specific Expression of the Oxytocin-enhanced Cyan Fluorescent Protein Fusion Transgene in the Rat Hypothalamus and Posterior Pituitary.2009

    • Author(s)
      Katoh, A.
    • Organizer
      VIIIth World Congress on Neurohypophysial Hormones
    • Place of Presentation
      Kitakyushu International Conference Center (Kitakyushu, Japan)
    • Year and Date
      20090904-20090908
  • [Presentation] Green Fluorescent Vasopressin Neurons Express Nuclear Red Fluoresc ence after Osmotic Stimulation in a Double Transgenic Rat.2009

    • Author(s)
      Fujihara, H.
    • Organizer
      VIIIth World Congress on Neurohypophysial Hormones
    • Place of Presentation
      Kitakyushu International Conference Center (Kitakyushu, Japan)
    • Year and Date
      20090904-20090908
  • [Presentation] Induction of the Arginine Vasopressin-enhanced Green Fluorescent Protein Fusion Gene in the Rat Locus Coeruleus.2009

    • Author(s)
      Todoroki, M.
    • Organizer
      VIIIth World Congress on Neurohypophysial Hormones
    • Place of Presentation
      Kitakyushu International Conference Center (Kitakyushu, Japan)
    • Year and Date
      20090904-20090908
  • [Presentation] 下垂体後葉ホルモン研究における蛍光タンパクの応用:トランスジェニックラットによる浸透圧負荷の検討2009

    • Author(s)
      加藤明子
    • Organizer
      第36回日本神経内分泌学会
    • Place of Presentation
      北九州国際会議場(北九州)
    • Year and Date
      20090904-20090905
  • [Presentation] Green Fluorescent Vasopressin Neurons Express Nuclear Red Fluoresc ence after Osmotic Stimulation in a Double Transgenic Rat.2009

    • Author(s)
      Fujihara, H.
    • Organizer
      2^<nd> School of Neuroendocrinology 2009
    • Place of Presentation
      Hotel San-sui Kan (Ohita, Japan)
    • Year and Date
      20090802-20090804
  • [Presentation] Specific Expression of the Oxytocin-enhanced Cyan Fluorescent Protein Fusion Transgene in the Rat Hypothalamus and Posterior Pituitary.2009

    • Author(s)
      Katoh, A.
    • Organizer
      2^<nd> School of Neuroendocrinology 2009
    • Place of Presentation
      Hotel San-sui Kan (Ohita, Japan)
    • Year and Date
      20090802-20090804
  • [Presentation] Induction of the Arginine Vasopressin-enhanced Green Fluorescent Protein Fusion Gene in the Rat Locus Coeruleus.2009

    • Author(s)
      Todoroki, M.
    • Organizer
      2^<nd> School of Neuroendocrinology 2009
    • Place of Presentation
      Hotel San-sui Kan (Ohita, Japan)
    • Year and Date
      20090802-20090804
  • [Presentation] オキシトシン-eCFPトランスジェニックラットへの浸透圧負荷の検討2009

    • Author(s)
      加藤明子
    • Organizer
      第82回日本内分泌学会学術総会
    • Place of Presentation
      群馬県民会館(群馬)
    • Year and Date
      20090423-20090425

URL: 

Published: 2011-06-16   Modified: 2016-04-21  

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