2008 Fiscal Year Annual Research Report
炎症性刺激に伴って生合成される新規リン脂質性生理活性脂質に関する研究
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20790077
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
桑田 浩 Showa University, 薬学部, 助教 (80286864)
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| Keywords | 生理活性脂質 / ホスホリパーゼA2 / ケモカイン / リポキシゲナーゼ |
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| Research Abstract |
本年度は、sPLA2-IIAおよびケモカイン群の発現に関与するPhospholipid X(s)の解析およびPhospholipid X(s)合成に関わるアシルCoA合成酵素(Acsl)の同定を行った。
Phospholipid X(s)の同定 : 本年度の検討ではこれまでの固相抽出カラムより分離の良い順相HPLCカラムを用いて脂質画分を分画し、各溶出フラクションについてsPLA2-IIAおよび各種ケモカイン発現誘導活性を検討した。その結果、これまでのSep Pak Silica固相抽出カラムを用いた解析では、sPLA2-IIAの発現を誘導する活性は主にPCを含む画分のみに存在していたのに対して、今回の分離条件では、PCを含む画分に加えて新たにPE/PIを含む画分にも活性が溶出されることが明らかとなった。また、同時にケモカイン発現についても検討した結果、Cxcl10、Cxcl11、Cxcl12、Cc13、およびCcl5の発現は、PC及びPE/PI画分に溶出されることが明らかとなった。現在、これらの画分をさらに逆相HPLCにより分離し、質量分析を行うことにより構造の決定を目指している。
Phospholipid X(s)合成に関わるAcslの同定 : サイトカイン依存的なsPLA2-IIAの誘導がTriacsin C (Acsl阻害剤)で抑制されることを明らかとしている。そこで、各Acsl shRNA安定発現株の作成および一過的なsiRNAの導入による各Acslをノックダウンした際のsPLA2-IIA発現に対する効果を検討した。1)Acsll及びAcsl4shRNA安定発現細胞において、sPLA2-IIAの発現は有為に抑制された。2)各Acsl siRNAを用いて、一過的にノックダウンを行った場合、Acsl4のsiRNAによりsPLA2-IIAの発現が抑制されたのに対して、Acsl1のsiRNAでは抑制されなかった。以上より、Acsl4はPhospholipid X合成に直接関与し、一方Acsl1は間接的(細胞中の脂質組成に影響を与えていると考えている)に関与することが考えられた。
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