2008 Fiscal Year Annual Research Report
NlpC/p60ファミリーに属する新規リン脂質代謝酵素群の機能解析
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20790231
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| Research Institution | Kagawa University |
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Principal Investigator |
宇山 徹 Kagawa University, 医学部, 助教 (30457337)
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| Keywords | H-rev107 / ホスホリパーゼA / ホスホリパーゼA_2 / グリセロリン脂質 / がん抑制遺伝子 / カルシウム非依存性N-アシル転移酵素 / レシチン・レチノール・アシルトランスラェラーゼ / 脂肪組織 |
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| Research Abstract |
がん抑制遺伝子として単離されたH-rev107(仮称RLP-3)の機能は未解明のまま残されており、我々は同タンパク質が新規脂質代謝酵素であると想定し、以下の実験を行った。
H-rev107のcDNAをラット、マウスおよびヒトからクローニングし、FLAGタグを付加した組換えタンパク質としてCOS-7細胞で発現させ、酵素活性を測定したところ、グリセロリン脂質から脂肪酸を遊離させるホスホリパーゼ(PL)A_1およびA_2活性が検出された。このうち、ラットH-rev107を抗FLAG抗体をリガンドとするアフィニティークロマトグラフィーによってほぼ均一にまで精製した。精製タンパク質は放射標識された種々のリン脂質を加水分解したが、PLA_1活性の方がPLA_2活性よりも強いことが明らかになった。また、いくつかの既知のPLA_2で見られるCa^<2+>依存性は認められなかったが、DTTにより活性化され、システインブロッカーであるヨード酢酸で阻害されることから、触媒に重要なシステイン残基の存在が示唆された。ラットH-rev107の変異体の解析により、ヒスチジン-21とシステイン-111が酵素活性に必須であることや、N末端側のプロリンに富む領域とC末端側の疎水性アミノ酸を多く含む領域が酵素活性に重要であることが判明した。RT-PCR法でラット組織におけるH-rev107の発現分布を解析したところ、調べた組織すべてにおいて発現しており、特に脂肪組織では高い発現を示した。
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