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2008 Fiscal Year Annual Research Report

病原性大腸菌O157のStx2産生量を規定するStx2ファージの遺伝的特性の解明

Research Project

Project/Area Number 20790339
Research InstitutionUniversity of Miyazaki

Principal Investigator

小椋 義俊  University of Miyazaki, フロンティア科学実験総合センター, 助教 (40363585)

Keywords感染症 / 微生物 / 毒素 / 遺伝子 / ゲノム
Research Abstract

腸管出血性大腸菌O157感染症において、Stx2産生性は重症化リスクファクターの1つであるが、Stx2産生量は株間で大きく異なる。本研究課題では、Stx2高産生株由来のStx2ファージとStx2低産生株由来のStx2ファージを比較することで、Stx2産生性の違いに起因する遺伝的特徴を明らかにすることを目的としている。Stx2高産生性ファージの配列は既に取得しているので、低産生性ファージの配列決定を行った。
まず、福岡市保健環境研究所より分与を受けた11株のStx2低産生性株について、RPLA法を用いてStx2量を定量し、Stx2低産生性を確認した。このうち、特に産生量の低い1株を選択し、フォスミドライブラリーを作成し、PCRにてstx2陽性クローンを選別した。そのクローンのランダムショットガンシークエンシングと、プライマーウオーキング法により、約60kbのStx2ファージ全長の配列を決定した。決定したファージ上に約10kbのPCRプライマーペアを6セット設計し、残りの10株について、PCRスキャンニングを行ったところ、サイズにバリエージョンはあるものの、全株で6ペアすべての増幅産物が得られた。一方、Stx2高産生株では、いずれのPCR産物も得られなかった。このことから、11株のStx2低産生株は由来が同じStx2ファージを保持していると考えられた。
次に、日本各地で分離された100株のO157について、Stx2産生量とStx2ファージのPCRスキャンニングを行った。低産生株については、低産生性ファージのPCRプライマーでほぼすべて増幅産物が得られたが、高産生性ファージのプライマーでは、高産生株の内、8株でほとんど増幅されなかった。これらの株は、新規のStx2高産生性ファージを保有していると考えられるため、現在、そのうちの1株のStx2ファージの配列を決定しているところである。

  • Research Products

    (11 results)

All 2009 2008 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results) Presentation (4 results)

  • [Journal Article] The complete genome sequence and comparative genome analysis of enteropathogenic E. coli O127 : H6 strain E2348/692009

    • Author(s)
      Iguchi A., et.al.
    • Journal Title

      J. Bacteriol 191(1)

      Pages: 147-354

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Distribution, functional expression genetic organization of Cif, a phage-encoded type III-secreted effector from enteropathogenic and enterohaemorragic Escherichia coli2008

    • Author(s)
      Loukiadis E., et.al.
    • Journal Title

      J. Bacteriol 190(1)

      Pages: 275-285

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Genomic comparison of the O-antigen biosynthesis gene clusters of Escherichia coli 055 strains belonging to three distinct lineages2008

    • Author(s)
      Iguchi A., et.al.
    • Journal Title

      Microbiology 154(2)

      Pages: 559-570

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Global regulation by horizontally transferred regulators establishes the pathogenicity of Escherichia coli2008

    • Author(s)
      Abe H., et.al.
    • Journal Title

      DNA Res 15(1)

      Pages: 25-38

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Systematic identification and sequence analysis of the genomic islands of the enteropathogenic Escherichia coli strain B171-8 by the combined use of Whole Genome PCR Scanning and fosmid mapping2008

    • Author(s)
      Ogura Y, et.al.
    • Journal Title

      J. Bacteriol 190(21)

      Pages: 6948-6960

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Complete Genome Sequence and Comparative Analysis of the Wild-type Commensal Escherichia coli Strain SE11 Isolated from a Healthy Adult2008

    • Author(s)
      Oshima K., et.al.
    • Journal Title

      DNA Res 15(6)

      Pages: 375-386

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] The defective prophage pool of Escherichia coli O157 : prophage-prophage interactions potentiate horizontal transfer of virulence determinants

    • Author(s)
      Asadulghani, et.al.
    • Journal Title

      PLoS Pathog (in press)

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Identification and sequence analysis of the genomic islands of EPEC B171 by fosmid mapping2009

    • Author(s)
      小椋義俊, 他
    • Organizer
      第82回日本細菌学会総会
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      20090312-14
  • [Presentation] Fosmid mapping法とWholegenome PCR scaming法を用いた腸管病原性大腸菌B171株のgenomicislandの網羅的な同定と配列決定2009

    • Author(s)
      小椋義俊, 他
    • Organizer
      第3回ゲノム微生物学会年会
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      20090305-07
  • [Presentation] Systematic identification and sequence analysis of the genomic islands of the enteropathogenic Escherichia coli strain B171-8 by the combined use of Whole Genome PCR Scanning and fosmid mapping2008

    • Author(s)
      Ogura. Y., et.al.
    • Organizer
      第43回日米コレラ細菌性腸管感染症専門部会
    • Place of Presentation
      Fukuoka
    • Year and Date
      20081117-19
  • [Presentation] Systematic identification and sequence analysis of genomic islands of enteropathogenic Escherichia coli strain B171-8 by the combinational use of Whole Genome PCR Scanning and fosmid mapping2008

    • Author(s)
      Ogura Y, et.al.
    • Organizer
      日米コレラ日本側総会
    • Place of Presentation
      大阪
    • Year and Date
      2008-07-30

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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