2008 Fiscal Year Annual Research Report
有機酸代謝異常症を対象とした簡易マススクリーニング法のシステム化に関する研究
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20790417
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| Research Institution | Fukuoka University |
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Principal Investigator |
吉田 秀幸 Fukuoka University, 薬学部, 助教 (20301690)
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| Keywords | 分析化学 / マススクリーニング / ジカルボン酸 / 有機酸代謝異常症 / 社会医学 / エキシマー蛍光 / 蛍光誘導体化 |
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| Research Abstract |
本研究は, 様々な極微量成分の高感度かつ特異的計測を可能とするエキシマー蛍光誘導体化法を用いて, 有機酸代謝異常症(グルタル酸尿症, メチルマロン酸尿症やCanavan病など)に起因する生体中のポリカルボン酸(アジピン酸, メチルマロン酸や飴アセチルアスパラギン酸など)を効率的に計測することにより, 上記疾病の簡便・迅速なマススクリーニング法を構築・システム化することを目的としている。研究初年度は, スクリーニング法をシステム化するための予備検討として, 既存の分析(反応・検出)条件を再最適化すると共に, 健常人試料を対象とした添加検量線を作成し, 方法論の問題点を抽出・整理した。
1. 誘導体化反応条件の最適化 : いくつかのピレン試薬を用いて上記ポリカルボン酸標準物質のエキシマー蛍光誘導体化分析を実施したところ, 特に4-(1-pyrene)butylamineが良好な結果を示した。また, 誘導体化反応の触媒として, EDCとHOBtの組合せが優れた触媒作用を示した。
2. 添加検量線の作成 : 上記1で設定した最適反応条件において, 健常人試料を対象とした添加検量線を作成した。アジピン酸やN-アセチルアスパラギン酸からは良好な検量線が得られたが, 上記触媒(EDCとHOBtの組合せ)ではメチルマロン酸のエキシマー蛍光誘導体化反応は進行せず, 触媒候補の再検討が必要となった。
3. 前処理法の検討 : 生体試料中のタンパク質やアミノ酸は本反応系を顕著に妨害するため, 前処理の導入について検討した。マススクリーニングに適用可能な簡易な計測システムとするため, ジカルボン酸種の効率的回収のためには, 自動化が可能なイオン交換・逆相機能を兼ね備えた固相抽出が最適であった。
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