2009 Fiscal Year Annual Research Report
動脈硬化症におけるマイクロRNAおよび遺伝子ネットワークの解明
| Project/Area Number |
20790531
|
|---|
| Research Institution | Okayama University |
|---|
Principal Investigator |
三好 亨 Okayama University, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (70444651)
|
|---|
| Keywords | 動脈硬化 / マイクロRNA |
|---|
| Research Abstract |
動脈硬化病変形成における、マイクロRNAの役割を明らかにすることが本研究の目的である。まず、その基礎的実験として、動脈硬化巣に集積するマクロファージに注目し、そのマイクロRNAのプロファイリングをおこなった。
マウス腹腔内マクロファージを採取し、培養条件下で酸化LDL(100マイクログラム/ミリグラム)による刺激を行い、6時間後にRNAを回収。酸化LDLの刺激の有無によるマイクロRNAの変化をマイクロアレイを用いて検討した。プロファイリングの結果によると、有意な変化を示したマイクロRNAが8個同定された。次にデータベース(miRBaseなど)を用いて、これらのマイクロRNAの標的となりえるメッセンジャーRNAを絞り込んだ。
選ばれたマイクロRNAがマクロファージの中で実際にどのようなメッセンジャーRNAの制御に関わっているかを明らかにするために、候補の8つのマイクロRNAを合成し、マクロファージに過剰導入。その後、候補となるメッセンジャーRNAの発現の変化をPCR法を用いて評価した。導入は、リポフェクション法を用いて行い、ラミンのSiRNAを同時に行うことでその導入効率を確認した。
|
