2009 Fiscal Year Annual Research Report
急性移植片対宿主病における分子マーカーの定量系の確立及びその機能解析
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20790735
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
山本 雅樹 Sapporo Medical University, 医学部, 助教 (80404664)
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| Keywords | GVHD / CCL8 / バイオマーカー / ケモカイン |
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| Research Abstract |
1.マウスGVHDの重症度と血漿中CCL8濃度の検討
GVHDモデルマウスにおいて、移植後5日目の血漿中CCL8濃度は移植後14日目での臨床的GVHDスコア、病理学的GVHDスコアと正の相関があり、さらにCCL8高値(2000>ng/ml)の群では生存率が有意に低下した。これにより移植後5日目の血漿中CCL8はGVHDの早期診断のみならず、予後予測にも有用なバイオマーカーである可能性が示された。
2.in vitroでのCCL8発現系の確立及びCCL8発現機序解析
先に作製したGVHDマウスモデルと同様にMHCの異なるマウスの組み合わせでホスト側樹状細胞とドナー側CD4陽性T細胞の共培養を行い、in vitroでのCCL8発現系を確立した。MHCクラスIIをブロックする抗体の存在下でCCL8の発現は低下し、樹状細胞とCD4陽性細胞のMHCクラスIIを介した細胞間の相互作用がCCL8発現に必要であることが示された。Real-time PCRによる検討ではin vitroにおいてCCL8に先行して発現するサイトカインmRNAはIL-2,IFN-γ,TNF-αであった。それらのサイトカインに対する中和抗体の存在下ではCCL8の発現は低下し、これらがCCL8発現を誘導することが示された。
3.in vitroでのCCL8産生細胞の同定
in vitroでのCCL8発現系から細胞を採取し、蛍光免疫染色にてin vitroにおけるCCL8産生細胞を同定した。その結果MHCの異なるCD4陽性T細胞の刺激を受けた樹状細胞がCCL8を産生していることが明らかとなった。
4.CCL8の発現機序におけるToll-like receptor (TLR)の関連を検討するためBalb/cマウスにTLRのリガンドを投与し、血漿中CCL8を定量した。その結果TLR刺激ではCCL8の発現は誘導されなかった。
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