2010 Fiscal Year Annual Research Report
ユビキチンプロテアソーム経路を応用した膵癌特異的新規樹状細胞癌ワクチン療法の開発
| Project/Area Number |
20790964
|
|---|
| Research Institution | Wakayama Medical University |
|---|
Principal Investigator |
尾島 敏康 和歌山県立医科大学, 医学部, 学内助教 (60448785)
|
|---|
| Keywords | ユビキチン / 樹状細胞 / アデノウイルスベクター |
|---|
| Research Abstract |
本年度は主にUb-Mesothelin融合遺伝子導入DCによるMesothelin特異的CTLの細胞傷害活性の増強効果についての検討を行った.
1.Ub-Mesothelin融合遺伝子発現Adenovirus vector (AxCAUbhMSLN)の作製
Ub遺伝子を健常人PBMCからgenomic DNAを抽出し,以下のprimerを用いたPCRで76アミノ酸Ubmonomerを増幅し、TAクローニングした。sense 5'-AGT CCG CTA GCC GCC ACC ATG CAG ATC TTC GTG AAG ACC-3'、antisense 5'-TAG TCC GTC GAC GTA TTT AAA TCG ACC CCC CCT CAA GCG CAG GAC-3'TAクローニングベクター(pCR^<[○!R]>,Invitrogen)上でUbシークエンスを確認した後、Ub fragmentをpAxCAwtに導入し、pAxCAUbを作製した。そして、あらかじめUb 3'primer内に設置したSwa I siteを利用してUbの下流にMesothelin cDNAをligation後、COS-TPC法にてAxCAUbMSLNを作製した。
2.Flow cytometryによるDC-AxCAUbMSLNにおけるMesothelinの発現解析
3.Ub-Mesothelin融合遺伝子導入DCによるCTL誘導,さらにIFN-γ ELISAによるCTL活性を測定した.上記にて作業仮説どおりUb-Mesothelin融合遺伝子導入DCはMesothelin遺伝子単独導入DCより強いCTLが得られることを立証した.本研究の前半部分をまとめて論文とし発表した.Cancer Letters 305 ; 32-9, 2011
|
