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2008 Fiscal Year Annual Research Report

IL-1βとインテグリンとの直接結合によるシグナル伝達機構の解析

Research Project

Project/Area Number 20890126
Research InstitutionKobe University

Principal Investigator

三枝 淳  Kobe University, 医学研究科, 特命助教 (20514970)

Keywordsインテグリン / インターロイキン-1 / 関節リウマチ
Research Abstract

1,IL-1βとインテグリンαvβ3との結合の検討
結合分析(binding assay)により、リコンビナントαvβ3がIL-1βに直接結合することを明らかにした。また、接着アッセイ(adhesion assay)により、αvβ3を強発現したK562細胞がIL-1βでcoatingされたplateに接着することを示した。
2,インテグリン非結合IL-1β変異体の作成と精製
QuickChange法にて、IL-1βに点突然変異を1〜3箇所導入し、それぞれpGEX-2Tベクターへサブクローンした。そして、野生型及び変異体のIL-1βを含むベクターをE cohi BL21に発現させ、タンパクをグルタチオンアフィニティークロマトグラフィーにて精製した。そしてエンドトキシン除去後、GSTタグをthrombin処理にて取り除き、ヘパリンセファロースカラムにてさらに精製してタンパク(野生型及び変異体IL-1β)を回収した。
3,インテグリン非結合IL-1β変異体の分析
作成した複数の変異体のうちのいくつかはIL-1βとは結合しないことを結合分析にて確認した。
4,インテグリン非結合IL-1β変異体の生理活性の検討
作成した野生型及び変異体IL-1βをヒトリウマチ滑膜細胞株に反応させて、IL-6 mRNAの誘導能及びMAPKの活性化の程度を検討した。野生型IL-1βは、IL-6 mRNAを誘導し、MAPKを活性化したが、インテグリンに結合しない変異体のうちのいくつかはどちらも誘導しないことを明らかにした。

  • Research Products

    (7 results)

All 2009 2008

All Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results) Presentation (2 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Galectin-3 is critical for the development of the allergic inflammatory response in a mouse model of atopic dermatitis.2009

    • Author(s)
      Saegusa J
    • Journal Title

      Am J Pathol. 174

      Pages: 922-31

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Pro-inflammatory secretory phospholipase A2 type IIA binds to integrins alphavbeta3 and alpha4betal and induces proliferation of monocytic cells in an integrin-dependent manner2008

    • Author(s)
      Saegusa J
    • Journal Title

      J Biol Chem 283

      Pages: 26107-15

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Galectin-3 protects keratinocytes from UVB-induced apoptosis by enhancing AKT activation and suppressing ERK activation.2008

    • Author(s)
      Saegusa J
    • Journal Title

      J Invest Dermatol 128

      Pages: 2403-11

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Direct binding of integrin alphavbeta3 to FGF1 plays a role in FGF1 signaling.2008

    • Author(s)
      Mori S
    • Journal Title

      J Biol Chem 283

      Pages: 18066-75

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] ガレクチン-3は皮膚アレルギー性炎症の進行に重要な役割を果たしている2008

    • Author(s)
      三枝 淳
    • Organizer
      日本免疫学会総会・学術集会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      20081201-20081203
  • [Presentation] Galectin-3 promotes activation of AKT and protects keratinocytes from apoptosis2008

    • Author(s)
      Saegusa J
    • Organizer
      International Investigative Dermatology
    • Place of Presentation
      Kyoto
    • Year and Date
      20080514-20080517
  • [Book] Galectins2008

    • Author(s)
      Liu FT
    • Total Pages
      279
    • Publisher
      Oxford University Press

URL: 

Published: 2010-06-11   Modified: 2016-04-21  

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