2020 Fiscal Year Annual Research Report
マクロファージの過剰炎症反応による炎症癌への治療応用
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20H01094
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
高金 くらら 秋田大学, 医学系研究科, 技術職員
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 –
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| Keywords | SKAP2 / 炎症 / TLR4 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
SKAP2はsrc キナーゼによってリン酸化を受けるアダプタータンパク質で、マクロファージや骨髄細胞において発現している。このSKAP2 ノックアウトマウスにLPS投与やAOM/DSS投与によってSKAP2 KOにおいて強い炎症と腫瘍形成が見られたことから、SKAP２は炎症を負に制御していることが示唆された。臨床において炎症性癌は予後が悪い為、SKAP2が炎症を制御する機構を明らかにすることは重要で、新たな治療標的となる基盤データ作りを目的とした。SKAP2 KOマウスに増加する炎症性サイトカインについて、RealTime-PCRやサイトカインアレイ、ウェスタンブロットで確認した。さらに、SKAP2と結合する分子を免疫沈降法で調べた。炎症に関わる分子をクローニングしてタグを付加した発現ベクターに遺伝子導入し、SKAP2との結合を検証した。結合が見られた分子ついては、内在性の分子の結合を免疫沈降法で検証した。また相互作用をさらに確認するために、細胞の染色において共局在するか確認した。SKAP2 KOマウスのLPS投与群において野生型マウスに比較してIL1βやIL6、NFkBなどの炎症性サイトカインの増加が見られた。その分子メカニズムとして、免疫沈降の結果からSKAP2はMyD88を介してTLRと結合しており、同時にSKAP2は炎症経路を抑制するチロシンフォスファターゼSHP-1,2と結合することが分かった。その結果、SKAP2を介してSirpa/SHP-1,2とTLR4の相互作用が促進され、SKAP2 KOマクロファージでは、その減弱を認めた。さらに、これらのことは細胞の蛍光染色によってもSKAP2とTLR4、SHP2の共局在が確認できた。以上のことから、SKAP2の負の炎症制御は、SHP1,2を介してTLR4シグナル経路を負に制御する事に依存していることが明らかになった。
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