2022 Fiscal Year Annual Research Report
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20H03174
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| Research Institution | Nara Medical University |
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Principal Investigator |
堀江 恭二 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (30333446)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 全能性 / 多能性 / ES細胞 / iPS細胞 / マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
動物個体における遺伝子改変は、遺伝子機能を解明するための手法として、医学・生命科学の発展に必須の技術となっている。近年のCRISPRシステムの到来に より、ほとんどすべての動物で、受精卵での遺伝子改変を簡便に遂行できるようになり、動物実験の重要性がさらに高まってきた。ところが、このことは同時 に、過去に例を見ないほどの動物実験の急増を招き、多くの研究機関において、飼育動物数が許容量の限界に達している。この状況を解決するための方策とし て、本研究では、マウスES細胞から全能性状態を誘導し、そこから人工的初期胚を作製し、個体発生を再現することを目指している。
全能性状態を評価する際には、一般的に、マウスES細胞の集塊から胚盤胞様構造を誘導する効率を指標に用いる。その際に、胚盤胞様構造の形成を、形態のみではなく、遺伝子発現の点からも簡便かつ確実に評価できることが望ましい。そこで、胚盤胞を構成する胚盤葉上層、栄養外胚葉の各々で特異的に発現する遺伝子に対して、異なる蛍光蛋白質を、両者共にノックインしたマウスES細胞株を作製した。このES細胞株を栄養外胚葉へ分化誘導することにより、胚盤葉上層と栄養外胚葉にノックインした蛍光蛋白が、想定通り、各々、低下、上昇することを確認した。さらに、全能性状態の２細胞期胚において高発現するMERVLレトロトランスポゾンのLTRに蛍光蛋白を連結したベクターを作製し、上記ES細胞へ導入した。ES細胞においては、1%前後の細胞においてMERVLの発現が一過性に亢進することが報告されているが、それと同様の結果が得られた。以上より、全能性状態から胚盤胞形成に至る過程を蛍光蛋白で可視化する細胞株を樹立できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
３つの蛍光蛋白を導入したES細胞株を樹立でき、今後の研究が加速化すると期待できる状況にある。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの研究で、全能性状態から胚盤胞に至る過程を、蛍光蛋白で可視化できるマウスES細胞を樹立できた。今後は、ES細胞からの全能性状態への移行を、種々の培養条件や転写因子の一過的な強制発現などにより試みることを計画している。転写因子については、種々のRNA-seqのデータから、候補の選定を終えており、次年度に速やかに遂行できる状況にある。
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