2022 Fiscal Year Annual Research Report
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20H03233
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| Research Institution | Japanese Foundation for Cancer Research |
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Principal Investigator |
大学 保一 公益財団法人がん研究会, がん研究所 がんゲノム動態プロジェクト, プロジェクトリーダー (80619875)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | DNA複製 / 突然変異 / DNAポリメラーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
<Polδコンポーネントの増減によるPolζ機能への影響>
２年次に構築したPolδの各コンポーネント（Cdc6、Cdc1、Cdc27）の発現量をコントロール可能な分裂酵母株を使用して、Polδ（デルタ）・Polζ（ゼータ）サブユニットの核内空間配置の変化を検証した。その結果、これらのタンパク質の発現量に応じた、Polδ・Polζそれぞれのカタリティックサブユニット（Cdc6、Rev3）の核内分布に変化は見られなかった。Cdc6の場合は、比較的、存在量の多いタンパク質であったせいか、どの条件においても核内に一様に存在していた。Rev3の場合は、逆に非常に数か少ないタンパク質のせいか、検出限界に近い状況での観察であり、明確な差異の観察することが困難であった。Rev3の解析においては、今後、１分子レベルでの観察（PALM、STORM法など）が必要であると考える。
<ヒト細胞におけるPolζ合成領域の同定>
研究代表者は、現在までに、ヒト培養細胞HCT116を用いて、特定のDNAポリメラーゼの活性部位を変異させ、そのポリメラーゼによるゲノムDNA中へのリボヌクレオチドの取り込みを誘導し、リボヌクレオチドの分布を指標として特定のポリメラーゼの合成領域を解析する方法を確立している。この方法をPolζに応用するために、必要な細胞株を作成を行った。現在までに、リボヌクレオチドを取り込むPolζノックイン細胞株の作成が完了した。現況では、Polζの合成領域を同定するために実験条件（ゲノDNAからリボヌクレオチドを除去する酵素RNASEH2を分解するための方法など）を検討している状況であり、今後も継続した実験、および、解析が必要である。
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| Research Progress Status |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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