2022 Fiscal Year Annual Research Report
p62変異による液－液相分離異常の微細形態とその分子基盤
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20H03415
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
和栗 聡 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (30244908)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田村 直輝 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (70745992)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 液滴 / SQSTM1 / ストレス顆粒 / 高浸透圧ストレス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）高浸透圧負荷におけるp62液滴とストレス顆粒の挙動解析: 本年度は論文作成を見据えて高浸透圧ストレス下に形成される両顆粒についての定量解析を含む詳細解析をすすめた。その結果、ライブセルイメージングによりp62顆粒はストレス顆粒（G3BP1を指標とした）よりも短時間で形成されること、電顕解析ではより高い電子密度を有し、オートファジー隔離膜を伴うことが分かった。また、生化学的解析により、p62顆粒はオートファジーにより分解されるがストレス顆粒は分解されなかった。以上より二つの液滴の性質が異なることを明らかにした。
（２）粘性プローブを用いた解析：まず、Haloタグリガンドを利用した粘性プローブを評価した。Haloタンパク質を安定に発現する細胞を作製し、高浸透圧ストレスと細胞質粘性（蛍光寿命）との関係を調べた。その結果、0.2Mショ糖条件下より0.4Mショ糖条件下の方が高粘性（蛍光寿命が長い）を示し、プローブの有用性が確認された。さらに細胞質の粘性とp62顆粒数を調べたところ、弱い正の相関が認められたことより、粘性とオートファジーの関連性が示唆された。今後はHalo-p62の発現細胞を用いてp62液滴自身の粘性解析に発展させる予定である。
（３）p62液滴形成を制御する新規タンパク質の探索：昨年度は高浸透圧ストレス状態でオートファジーにより特異的に分解されるユビキチン化タンパク質を質量分析計により特定した。今年度は研究候補分子を絞り込むために、液滴への局在性およびオートファジーの基質性について解析し、10個の分子を抽出した。
（４）癌組織におけるp62液滴の解析：昨年度は乳癌組織で認められるp62液滴が腫瘍の悪性度と関連することを見出した。さらに予後解析を行ったところ、p62液滴陽性症例は無再発期間が有意に短いことを見出した。現在論文化のための図作成を行っている。
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| Research Progress Status |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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[Journal Article] STING signalling is terminated through ESCRT-dependent microautophagy of vesicles originating from recycling endosomes2023
Author(s)
Kuchitsu Y, Mukai K, Uematsu R, Takaada Y, Shinojima A, Shindo R, Shoji T, Hamano S, Ogawa E, Sato R, Miyake K, Kato A, Kawaguchi Y, Nishitani-Isa M, Izawa K, Nishikomori R, Yasumi T, Suzuki T, Dohmae N, Uemura T, Barber GN, Arai H, Waguri S, Taguchi T
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Journal Title
Nature Cell Biology
Volume: 25
Pages: 453～466
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] The UFM1 system regulates ER-phagy through the ufmylation of CYB5R32022
Author(s)
Ishimura R, El-Gowily AH, Noshiro D, Komatsu-Hirota S, Ono Y, Shindo M, Hatta T, Abe M, Uemura T, Lee-Okada HC, Mohamed TM, Yokomizo T, Ueno T, Sakimura K, Natsume T, Sorimachi H, Inada T, Waguri S, Noda NN, Komatsu
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Journal Title
Nature Communications
Volume: 13
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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