2020 Fiscal Year Annual Research Report
がん進展を駆動するSrc依存的エクソソーム分泌の意義とメカニズム
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20H03456
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
小根山 千歳 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍制御学分野, 分野長 (90373208)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | Src / エクソソーム / がん進展 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、エクソソームががん形質発現においてどのような意義をもつのか？を問い、その詳細な分子基盤を解明することにより、がん進展メカニズムに対する理解を深め、新たながん制御戦略への展望を得ることである。そこでこれまでの研究を発展させ、以下の3項目に焦点を絞って、がん進展過程におけるSrcシグナルの制御破綻と、それががん特異的なエクソソーム分泌を亢進させる分子メカニズムを解析することとした。
①がん特異的エクソソーム形成を支配する分子機構
②がん特異的miRNAの選択的エクソソーム内包機構
③がんエクソソームの生体内動態とがん進展
今年度は、①に対応するSrcがんシグナルにおいてエクソソーム形成を制御する分子を探索するため、エクソソーム内包蛋白質のプロテオミクス解析により、がん細胞内でSrcシグナルの制御破綻を受けてエクソソーム形成に関わる因子を探索した。これまでの予備検討で行ったエクソソーム回収法は多数のヘテロな微粒子が混在していたため、密度勾配によるエクソソーム単離精製を行ない解析した結果、Src依存的に分泌されたエクソソーム内には、Adhesomeといわれる細胞接着に関わる分子集団が内包されていることを見出した。一方、Srcファミリーキナーゼ (SFK)間でラフトへの局在性向とエクソソーム分泌亢進能を調べた結果、がん形質誘導能と同様に相関があることが明らかとなった。そこでSrcあるいはFynについて脂質修飾部位に変異を入れ同一分子における膜ドメイン局在を強制的に変化させた場合のエクソソーム分泌量を解析する予定であったが、構築した細胞系で感染が生じたため、細胞系のクリーンアップと再作製を行なった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
Srcファミリーキナーゼの膜ドメイン局在を強制的に変化させた変異体を導入した細胞で感染が生じ、細胞系のクリーンアップと再作製を行ったため、エクソソーム分泌量の解析がやや遅くなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
再作製したSrcファミリーキナーゼの膜ドメイン局在を強制的に変化させた変異体を導入した細胞を用いた解析により、エクソソーム分泌量と膜ドメイン局在の相関を明らかにする。同時に、膜ドメイン局在が異なる際のSrc下流シグナル経路の詳細な解析を進める。一方で、これまで見出したSrc活性依存的なエクソソームへのmicroRNAの内包に関わる候補分子について、Src活性化によるリン酸化やmicroRNAとの親和性の変化を解析する。同時に、この候補分子のノックダウンによりエクソソームに内包されるmicroRNAの変化とmicroRNAの配列や機能的特徴を解析する。また、候補分子をノックダウンした細胞由来のエクソソームを非がん細胞や浸潤能の低いがん細胞に添加して生じる表現型の変化を明らかにする。
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[Journal Article] Filopodium-derived vesicles produced by MIM enhance the migration of recipient cells2021
Author(s)
Nishimura T, Oyama T, Hu HT, Fujioka T, Hanawa-Suetsugu K, Ikeda K, Yamada S, Kawana H, Saigusa D, Ikeda H, Kurata R, Oono-Yakura K, Kitamata M, Kida K, Hikita T, Mizutani K, Yasuhara K, Mimori-Kiyosue Y, Oneyama C, Kurimoto K, Hosokawa Y, Aoki J, Takai Y, Arita M, Suetsugu S.
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Journal Title
Dev Cell
Volume: 56
Pages: 842-859
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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