2020 Fiscal Year Annual Research Report
紫外線照射による制御性T細胞の誘導と解析―皮膚病変のリキッドバイオプシーの開発
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20H03703
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
森田 明理 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 教授 (30264732)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | 紫外線 / 制御性T細胞 / 免疫寛容 / リキッドバイオプシー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
波長ごとの生物学的な作用（細胞、実験動物、ヒト）を解析する照射装置の開発・整備を行い、紫外線による制御性Ｔ細胞 (Treg)の誘導波長はあきらかになりつつある。光線療法後の皮膚病変のTregの誘導について、現在の免疫組織染色では４種類以上の多重染色ができないためわずかなマーカーでしか解析することができず、一方、組織から分離する場合は、組織からの分離も容易ではないばかりか、細胞数が取れなくTregの十分な解析は行えていない。病変部の血液（皮疹血）なら、酵素処理を必要とせず、短時間で解析でき、病変部の環境 (サイトカイン、炎症細胞など) を表しているのではないかと考え、皮膚病変の皮疹血リキッドバイオプシー（皮膚生検時の少量の皮疹血の採取）からの解析を考えた。2020年度は、皮膚病変の皮疹血リキッドバイオプシーのテクニックの確立に成功した。現在の私たちのラボでは、10マイクロリットルの全血から、8000個のCD4陽性細胞、4000個のCD8陽性細胞の分離に成功し、FACS解析（BD、Fortessa X-20）、CyTOF、T細胞レパトア解析、RNAシークエンス解析のすべてが皮疹血からできるようになった。現在、乾癬、皮膚T細胞リンパ腫の病変部から、皮疹血リキッドバイオプシーで微小免疫環境の解析を行うことができ、症例を集積しているところである。あわせて、シングルセルRNAシークエンス解析ができるようにBD Rhapsodyを導入し、セットアップを行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
皮膚病変の皮疹血リキッドバイオプシーのテクニックの確立に成功した。現在の私たちのラボでは、10マイクロリットルの全血から、8000個のCD4陽性細胞、4000個のCD8陽性細胞の分離に成功し、FACS解析（BD、Fortessa X-20）、CyTOF、T細胞レパトア解析、RNAシークエンス解析のすべてが皮疹血からできるようになった。現在、乾癬、皮膚T細胞リンパ腫の病変部から、皮疹血リキッドバイオプシーで微小免疫環境の解析を行うことができ、症例を集積しているところである。
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| Strategy for Future Research Activity |
311nmナローバンドUVB・308nmエキシマライト・PUVAバス・UVA1照射(治療)前後で、皮膚病変の皮疹血リキッドバイオプシーを行い、リンパ球を分離し、CyTOFによる多重染色、高速セルソーター（BD FACS melody）を用いたシングルセル解析、次世代シーケンサによるトランスクリプトーム解析などを行いメカニズムの解明を進め、誘導されるTregのサブセット解析、さらなる効率的なTregの誘導の基盤開発を進めていく。
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Research Products
(3 results)
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[Journal Article] Proenkephalin+ regulatory T cells are expanded clonally by ultraviolet-B exposure and maintain skin homeostasis with a healing function2020
Author(s)
Hiroaki Shime, Mizuyu Odanaka, Makoto Tsuiji, Takuma Matoba, Masaki Imai, Yoshiaki Yasumizu, Ryuta Uraki, Kiyoshi Minohara, Maiko Watanabe, Anthony John Bonito, Hidehiro Fukuyama, Naganari Ohkura, Shimon Sakaguchi, Akimichi Morita, and Sayuri Yamazaki
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Journal Title
Proc Natl Acad Sci
Volume: 117
Pages: 20696-20705
DOI
Peer Reviewed
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