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2022 Fiscal Year Annual Research Report

ユビキチン修飾による鉄代謝制御系の最上流因子の探索

Research Project

Project/Area Number 20J20906
Research InstitutionKyushu University

Principal Investigator

市原 知哉  九州大学, 生体防御医学研究所, 特別研究員(PD)

Project Period (FY) 2020-04-24 – 2023-03-31
Keywords鉄代謝 / ユビキチン / FBXL5
Outline of Annual Research Achievements

本研究は、FBXL5を分解制御する因子を同定することを目的とする。予備的実験においてFBXL5の分解を蛍光でモニターできるレポーター細胞を作製した。CRISPR/Cas9システムを用いたゲノムワイドスクリーニングをおこなうために、レンチウイルスを用いてsgRNA (single guide RNA)ライブラリーを蛍光レポーター細胞に導入した。ライブラリー導入細胞の中で鉄欠乏条件下において蛍光が安定化している細胞集団をセルソーターで回収し、次世代シークエンサー解析により回収後の細胞に濃縮されたsgRNA配列を探索した。しかしながら、回収できた蛍光安定化細胞はごく少数であったため、今回の解析では統計学的に有意に回収後の細胞に濃縮されたsgRNA配列を同定することが出来なかった。
並行して、生化学的手法によるスクリーニングをおこなった。FBXL5の野生型鉄結合ドメインまたはデグロンを欠損した変異型鉄結合ドメインを過剰発現した細胞を用いてIP-MSをおこない、野生型鉄結合ドメインに特異的に結合するユビキチンリガーゼを複数同定した。しかし、これらの候補因子を個別にノックダウンしてもFBXL5の安定化を確認することが出来なかった。この結果は、FBXL5の分解制御に複数のユビキチンリガーゼが関与している可能性を示唆しており、さらに文献情報を踏まえると、ある一群のユビキチンリガーゼが協調的にFBXL5を分解制御しているという仮説が考えられる。

Research Progress Status

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

  • Research Products

    (4 results)

All 2022

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Identification of unannotated coding sequences and their physiological functions2022

    • Author(s)
      Ichihara Kazuya、Nakayama Keiichi I、Matsumoto Akinobu
    • Journal Title

      The Journal of Biochemistry

      Volume: 173 Pages: 237~242

    • DOI

      10.1093/jb/mvac064

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 翻訳開始因子eIF2Dは翻訳伸長中の内発的リボソーム不安定化 (IRD)を抑制する2022

    • Author(s)
      市原 知哉、松本 有樹修、幡野 敦、松本 雅記、茶谷 悠平、田口 英樹、中山 敬一
    • Organizer
      第45回日本分子生物学会年会
  • [Presentation] eIF2D surveils intrinsic ribosome destabilization (IRD) during translation elongation2022

    • Author(s)
      市原 知哉、幡野 敦、松本 雅記、茶谷 悠平、田口 英樹、中山 敬一、松本 有樹修
    • Organizer
      学術変革領域(A) 「マルチファセット・プロテインズ」第3回領域会議
  • [Book] セントラルドグマの新常識2022

    • Author(s)
      田口 英樹、小林 武彦、稲田 利文
    • Total Pages
      264
    • Publisher
      羊土社
    • ISBN
      978-4-7581-0404-3

URL: 

Published: 2023-12-25  

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