重症熱性血小板減少症候群ウイルスに対する感染阻止モノクローナル抗体の探索

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20J22501
• Research Institution: Nara Medical University
• Principal Investigator: 三須 政康 奈良県立医科大学, 医学研究科, 特別研究員(DC1)
• Project Period (FY): 2020-04-24 – 2023-03-31
• Keywords: SFTS / モノクローナル抗体 / 治療 / 組換えウイルス

Outline of Annual Research Achievements

重症熱性血小板減少症候群（SFTS）は治療法の確立が急務となっている疾患の1つである。本研究計画では、感染阻止モノクローナル抗体（mAb）産生ハイブリドーマの樹立および、mAbのエピトープ解析などによるSFTSウイルス感染阻止メカニズムの解明することを目標とする。
本年度（令和2年度）は、SFTSウイルスに対するモノクローナル抗体スクリーニング法の構築を行った。当初の計画では、スクリーニング系として中和試験のみであったが、ELISA（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay）、IFA（Immuno-Fluorescence Assay）を追加することで、より厳密な解析へ拡充した。
中和試験では、抗原抗体反応させるウイルス量、培養時間の検討を行い、迅速（培養時間が2日間）かつ簡便な系を構築することができた。ELISAでは、抗原としてSFTSウイルス感染細胞ライセート、一過性SFTSウイルスGP発現プラスミドを導入した細胞ライセート、組換えm8を用いたSFTSウイルスGPまたはGP＋Nを有するウイルス様粒子（VLP）を比較した。既存の抗SFTSV_GP抗体を用いて検討した結果、VLPが前述の細胞ライセートよりも高感度であったことから、VLPを用いたELISAがスクリーニング系の一つとして採用可能であることが明らかとなった。IFAでは、細胞固定に使用する固定液（ホルマリン、アセトン／メタノール）によって検出可能な抗体に差異を認め、異なる固定液によって新たに2種類のスクリーニング系を構築することができた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画通り、SFTSウイルスに対するモノクローナル抗体のスクリーニング系の確立に成功し、期待した実験成績を得ているため。

Strategy for Future Research Activity

次年度（令和3年度）は、組換えm8（m8-SFTSV_GP+N）を接種したマウス脾細胞を調製し、ミエローマ細胞と細胞融合させたハイブリドーマを作製、クローニングを行う予定である。更に、本年度既に構築したスクリーニング系を用いてモノクローナル抗体（mAb）産生ハイブリドーマのスクリーニングを行う予定である。
また、スクリーニングで得られたmAbをSFTSウイルス感染I型IFN受容体ノックアウトマウスに定期投与後、治療効果やmAbに対するエピトープ解析も実施する予定である。