オートファジー抑制因子Rubiconが加齢に伴い増加するメカニズムの解明

2020 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20J22554
• Research Institution: Shibaura Institute of Technology
• Principal Investigator: 大場 柾樹 芝浦工業大学, 理工学研究科, 特別研究員(DC1)
• Project Period (FY): 2020-04-24 – 2023-03-31
• Keywords: Rubicon / ショウジョウバエ / 老化 / オートファジー

Outline of Annual Research Achievements

オートファジーは加齢に伴い低下することが知られている。要因の一つとしてオートファジー抑制因子の一つであるRubiconが加齢に伴い増加することが挙げられるが、Rubiconの増加メカニズムは明らかになっていない。我々はこれまでにショウジョウバエで加齢に伴うRubicon蛋白質の増加がmRNAレベルの変化を伴わないことを見出しており、Rubiconの増加メカニズムとしてRNA修飾による翻訳効率化または翻訳後修飾によるRubicon蛋白質の安定化を考え、本研究を行った。
Rubiconの修飾解析を簡便にするため、HAタグ付きRubicon過剰発現ショウジョウバエを作製し、加齢に伴う発現変化を調べた。その結果、HA-Rubiconは野生型ショウジョウバエと同様に蛋白質レベルでのみ増加していた。本実験で用いたショウジョウバエの発現カセットはRubiconコーディング領域および非翻訳後修飾領域（3’UTR）のみを含み、イントロンを含まない。よって、イントロンのRNA修飾は加齢に伴うRubicon蛋白質の増加に関与しないと考えられた。そこでもう一つの候補である翻訳後修飾の解析に取り組んだ。若齢または老齢のHA-Rubicon過剰発現ショウジョウバエからHA抗体を用いてRubiconを免疫沈降し、LC/MS/MSにて翻訳後修飾を網羅的に解析した。その結果、加齢に伴い変動する翻訳後修飾の同定に成功した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本年度はRubiconの加齢に伴い変動する修飾の同定が目的であり、加齢に伴い変動する翻訳後修飾を発見したため。

Strategy for Future Research Activity

当初の計画通り研究を遂行していく予定である。