2021 Fiscal Year Annual Research Report
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20J40228
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
徳田 恵美 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 特別研究員(RPD)
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| Project Period (FY) |
2020-04-24 – 2023-03-31
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| Keywords | がん / リン脂質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は所属研究室で発見された新規リゾリン脂質であるリゾホスファチジルイノシトール3,4,5-三リン酸（LysoPIP3）の本態解明を目的としている。申請者は令和2年度までにLysoPIP3の生成酵素を数種類同定し、そのうちの1種類の生成酵素について解析を進めていた。令和3年度はそれに加えてもう1種類の生成酵素について解析を進めた。
スクリーニングでは各種生成酵素候補を過剰発現させたHEK293T細胞株を用いて、LysoPIP3量が発現させた時にLysoPIP3が増える細胞株を探索した。このスクリーニングで申請者が新たに同定したLysoPIP3生成酵素のうちの1つについてin vitroでさらに解析を行った。その結果、本酵素はin vitroでもLysoPIP3を生成することが確認された。また、本酵素はPIP3以外の基質にも作用し、他の新規リゾリン脂質も生成することが明らかとなった。これらの結果から、本酵素はLysoPIP3生成酵素であることを明らかにした。現在、本酵素の発現量が高いがん細胞株を見出し、ノックアウト細胞株を作製しているところである。
また、LysoPIP3をより効率よく検出する測定系を構築した。これまでBligh & Dyer法を用いて脂質抽出を行い、LC-MS/MSにて検出していた。抽出条件の検討を行い、組織や細胞株からLysoPIP3を高効率に抽出する新たな方法を開発した。今後、この検出系を用いてマウスやヒトのがん組織内におけるLysoPIP3量の変化を解析する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請者は新規リゾリン脂質であるLysoPIP3の生成酵素を明らかにするためスクリーニングを行い、数種類の生成酵素を同定することに成功した。
そのうちの1つの酵素についてLysoPIP3生成を介してがん細胞株の細胞運動能に関与していることを明らかにした。
また、もう一つの酵素についてはLysoPIP3以外にも複数の新規リゾリン脂質を生成する酵素であることを突き止めた。
さらに、これまでより感度良くLysoPIP3を検出することが出来る脂質抽出系を確立することに成功し、今まで検出できなかった細胞や組織でもLysoPIP3を測定することを可能にした。
このように研究はおおむね順調に進展している。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在同定したLysoPIP3生成酵素の発現が高いがん細胞株を用いてノックアウト細胞を作製しているところである。このノックダウン細胞を用いて細胞増殖能、細胞運動能、接着能などがん細胞特性に生成酵素およびLysoPIP3が関与しているかを検討する予定である。
また、申請者や確立した高感度でLysoPIP3を検出できる測定系を用いてがんモデルマウスのがん組織などを測定し、がんの悪性化とLysoPIP3量変化を調べる予定である。
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