2022 Fiscal Year Research-status Report
NASH憎悪因子である悪玉ミュータンス菌の検出キットの開発
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20K02352
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| Research Institution | Hiroshima International University |
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Principal Investigator |
長嶺 憲太郎 広島国際大学, 健康科学部, 教授 (80412352)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北川 雅恵 広島大学, 病院(歯), 助教 (10403627) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | LAMP法 / NASH / ミュータンス菌 / ジンジバリス菌 / 口腔内細菌 / う蝕 / 歯周病 / 遺伝子検査 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、唾液中に含まれているミュータンス菌の中でもcnm/pa陽性ミュータンス菌を短時間に且つ簡便に検出する方法を確立し、cnm/pa陽性ミュータンス菌の保有頻度と対象者背景との関連性を明らかにすることを目的としている。今回、等温で遺伝子を増幅できるLAMP法を用いた検出法の確立に関する研究を行った。
現在までに、cnm遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計を終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。今回、更に詳細な検討を行った結果、本技術がcnm遺伝子を十分検出できるレベルであることを確認し、その結果を報告した（Kitagawa et.al. Analytical Biochemistry Volume 605, 113812, 2020）。すなわち、口腔内細菌のうちジンジバリス菌、ソブリヌス菌、カンジダ菌のDNAを鋳型としてLAMP反応を行っても、これらの細菌は検出できなかった。これは、他の細菌と区別して特異的に検出できていることをあらわしている。また、pa遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計も終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。条件検討の結果、ポリエチレングリコール濃度を8％にすることで短時間に検出することができた。さらに、今回作製したプライマーが、ミュータンス菌以外の口腔常在菌 (ソブリヌス菌、ジンジバリス菌、カンジダ菌) に反応せず、cnm遺伝子とpa遺伝子のみに特異的に反応することも確認できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度までで、cnm遺伝子およびpa遺伝子を特異的に増幅できるプライマーのの選定は完了した。今後の検討項目は、実際に唾液を用いて検出できるかである。
一方、コロナ禍の影響があり、唾液の採取が思うように進まなかった。このため、予定していたサンプル数を確保できなかった。
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| Strategy for Future Research Activity |
新型コロナウイルスの感染法上の分類を2023年5月8日から「5類」に引き下げるとの政府の方針があり、唾液のサンプリングが容易に出来るようになる。唾液のサンプリングから細菌培養までのプロトコルは確立しているので、直ぐに実施できる体制は整っている。
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| Causes of Carryover |
コロナ禍、唾液のサンプリングが思うように進まなかった。今年度は5月8日より、新型コロナウィルス感染症の位置づけを現在の「2類相当」から「5類」に移行するため、サンプリングが容易となり、計画通りに遺伝子検査を行う予定である。
また、当初予定していた雑誌掲載が遅れたため、次年度使用額が生じた。これについては、今年度に掲載する旨の連絡を受けたため、それにかかる費用を計上している。
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