2022 Fiscal Year Annual Research Report
発がんリスク指標DNA損傷体の分析における実用・定量性の追求と革新的感度の獲得
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20K05569
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| Research Institution | Gifu Pharmaceutical University |
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Principal Investigator |
江坂 幸宏 岐阜薬科大学, 薬学部, 教授 (70244530)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | DNA損傷 / RNA損傷 / 発がんリスクマーカー / LC/MS/MS / CEオンライン濃縮/ESI-MS / グリオーマ / テモゾロミド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
１．LC/MS/MSをプラットホームとする実用発がんリスク検査法の包括的開発：
１）塩基形態での損傷体抽出条件の最適化：飲酒由来損傷体にフォーカスし、DNA損傷体をヌクレオシド形態、および塩基形態で定量的に回収する方法を確立した。（以下R4成果）RNAについては、酵素反応での回収が不十分であることが示され、120℃、ギ酸と塩酸の混合作用条件での定量的回収条件を確立した。２）ESI効率向上によるMS検出感度向上：移動相組成が有機溶媒主体のHILICの採用、重炭酸アンモニウムの添加により、ESIを促進することで感度を２桁程度向上した。（以下R4成果）様々な条件下で詳細なプロダクトイオンの分析を行い、添加による過渡的中間体の形成の可能性を示した。３）前処理抽出基材の開発：核酸塩基の回収のために、ポリエチレンイミンで表面修飾した固定相を開発し、特徴的な濃縮水層が形成される新規固定相の開発を行った。（以下R4成果）さらに、充填剤を化学的に架橋して、ペレット状に形成し、多検体簡易処理に有用な簡易使用を可能にする方法を確立した。４）重水素化内部標準の整備：重水素化アセトアルデヒドを用いた安価な損傷体同位体ISのヌクレオシド体および塩基体の製造に成功した。５）実試料分析への展開：（以下R4成果）肝臓細胞から抽出したDNA中の損傷分析に展開した。
2．キャピラリー電気泳動（CE）オンライン濃縮-ESI-MS検出による革新的絶対感度獲得：酸性条件下で損傷塩基をカチオン状態にして、大量注入電場増強スタッキングと過渡的等速電気泳動により1μL試料から1000倍濃縮し、数アトモルの損傷塩基の検出を達成した。
3. 抗がん剤の効果指標としてのメチル化グアニン分析への展開：抗がん剤によって生じた培養グリオーマのDNA中のメチルグアニンの定量を通して、より効果的な化学療法を実行するために有用な知見を獲得した。
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Research Products
(8 results)
