2022 Fiscal Year Annual Research Report
Novel screening system expressing human metabolic enzymes in vivo
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20K06416
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| Research Institution | Rakuno Gakuen University |
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Principal Investigator |
寺岡 宏樹 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (50222146)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
生城 真一 富山県立大学, 工学部, 教授 (50244679)
小林 麻己人 筑波大学, 医学医療系, 准教授 (50254941)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 実験動物代替法 / ゼブラフィッシュ / トランスジェニック動物 / 代謝酵素 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1）ヒトシトクロームP450（hCYP）トランスジェニック（TG）フィッシュの確立： hCYP3A7に加えて、ｈCYP1A1、3A4とも全身にマーカーとして共発現させた改変型クラゲ蛍光蛋白（EGFP）蛍光を全身に発するTGフィッシュを作成することができた。薬理毒性試験で最も多用されるラットに注目し、rCYP2E1-TGフィッシュを作成することができた。 2）hCYP3A7-T-TGフィッシュに対するサリドマイドの影響： hCYP3A7-T-TGフィッシュのうち、比較的強いEGFP蛍光を示す集団をインクロスさせることでEGFP蛍光を強く発するTGフィッシュを作成した。サリドマイド暴露により胸ビレ短縮の傾向が認められたがごく弱かった。hCYP3A7-EGFPプラスミドを注入したF0胚仔魚のモザイク状の発現に比べると、TGフィッシュのEGFP蛍光はやはり弱かった。Whole-mount in situ hybridizationでhCYP3A7を検出した結果も同様であった。hCYP3A7-EGFPを全身に大量に発現する胚は死滅する可能性が考えられた。CYPを肢芽や肝臓など、一部の組織に特異的に発現するTGの開発については、2023年度から始まる科研研究で取り組む予定である。 3）rCYP2E1-TGフィッシュに対するアセトアミノフェン毒性： アセトアミノフェン（APAP）はCYP2E1で代謝された産物が肝毒性を示すことでよく知られている。本研究に置いて、APAPはゼブラ胚仔魚の眼と肝臓の大きさを減少させた。前者はrCYP2E1発現と無関係であったが、後者はrCYP2E1-TGフィッシュで有意に増強した。これらの効果はヒトのAPAP中毒の解毒剤であるN-アセチルシステインで抑制された。
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