2021 Fiscal Year Research-status Report
非アルコール性脂肪性肝疾患において発現が増加するmiRNAの機能解析
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20K07065
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| Research Institution | Chugoku Gakuen University |
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Principal Investigator |
田中 徹也 中国学園大学, 公私立大学の部局等, 教授(移行) (10346380)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡本 貴行 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 准教授 (30378286)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 非アルコール性肝炎 / miRNA導入 / 脂肪蓄積 / 炎症 / 繊維化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）は、軽度の脂肪肝から炎症や線維症を伴う重度の脂肪性肝炎までの症状を示す。調節不全脂質代謝と脂質沈着の調節不全が、NAFLD病因の初期段階に起こる現象としてよく知られている。最近、miR-199a-3pとmiR-126-3pがNAFLD患者の肝臓組織でアップレギュレーションされていることを見出した。本研究課題では、脂肪細胞の分化と脂質代謝に関連する遺伝子発現におけるmiRNAの影響を調査・検討している。
コンフルエントなマウス3T3-L1前脂肪細胞へmiRNAをLipofectamine RNAiMAXによりトランスフェクションし、細胞をインスリン、デキサメタゾン、3-イソブチル-1-メチルキサンチン、およびロシグリタゾンによって3日間分化させたのちに、細胞内脂質沈着とmRNA発現を、それぞれオイルレッドO染色と定量的RT-PCRによって分析した。
miR-199a-3pとmiR-126-3pはどちらも、対象群miRNAと比較して脂肪細胞への分化が促進された。定量的 PCR による遺伝子発現解析およびウエスタンブロッティングによるタンパク質発現解析結果、これらのmiRNAが、CCAAT /エンハンサー結合タンパク質-α（C /EBPα）を増加させ、低酸素誘導因子（HIF）-1αの発現を減少させていることを明らかにした。
HIF-1αはC/EBPαの発現を低下させることが報告されており、miR-199a-3pおよびmiR-126-3pのアップレギュレーションは、HIF-1αを標的とした脂質代謝の調節不全を介して脂肪細胞の分化を促進している可能性を示唆している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究代表者の大学業務ほかの増加による時間的制約と、新型コロナウィルスの蔓延による断続的な蔓延防止法の発令による移動制限による。これらにより、旧所属大学の設備を使用する予定の研究が滞理、また、協力して行う実験の実施に遅延が生じているほか、対面による打ち合わせが不足してやや遅延が生じている。最終年度は当初目的まで完了するようにしたい。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続く新型コロナウィルスの蔓延・蔓延防止法の断続発令は予測不能である。本年度構築してきた、分担者・協力者との Web を用いた協議・連絡を密にし、双方の大学での分担を明確にして研究を進め、一部は外注による分析・解析に変更しながら、目的を達成すべく本研究を進める。
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| Causes of Carryover |
進捗状況の項で示した、遅延の理由に関連して、業務増加や新型コロナウィルスによる断続的蔓延防止法発令により、研究実施がやや遅れていることにより未使用金が生じた。最終年度はやや遅れて実施できていない実験系を最大限に進めて当初の目的を達成する予定である。そのための実験実施に係る、試薬・機器類の物品費用を中心として使用させていただく。また、遅延を取り戻すため、残金を勘案しながら一部の解析を外注する可能性もあり、目的達成のため有効に施行させていただきたい。最終的には論文投稿及び学会発表の旅費などにも使用させていただく予定である。
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