2020 Fiscal Year Research-status Report
先天性角化異常症細胞のゲノム不安定性を招く新規ヌクレオチド除去修復因子の欠損
| Project/Area Number |
20K07308
|
|---|
| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
|---|
Principal Investigator |
丹伊田 浩行 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (20336671)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | テロメレース / シクロブタンピリミジンダイマー / NER |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
筆者はDNA鎖架橋による損傷が生じたときに働くヌクレオチド除去修復(NER)がHela細胞内で働くときに必要とされる分子のスクリーニングをsiRNAライブラリーを用いて行い、いくつかの候補分子を同定した。この中に染色体末端のテロメアを伸張する酵素テロメレースの触媒サブユニットTERTが含まれていた。TERTはNERが作用する典型的なDNA損傷であるシクロブタン型ピリミジンダイマー(CPD)の除去に必要とされるか、TERTノックダウンHela細胞にUV照射を行い細胞内のCPDを定量した。その結果TERT欠損した細胞ではCPDの除去が著しく遅延することが明らかとなった。
TERTの欠損が細胞内DNA全領域に生じたCPD除去を阻害することはTERTがこれまで報告されているテロメア上の機能に加え内部DNAにおいても未知の機能を有している可能性が示唆されたのでテロメレースの他のサブユニットテロメレースRNA成分(TERC)、ジスケリン(DKC1)をノックダウンしCPD除去の定量を行なった。TERC, DKC1それぞれを欠損させてもCPD除去は遅延認めCPD除去を遂行するためにはテロメレース酵素複合体が必要とされることが明らかとなった。この結果はテロメレースホロ酵素がCPD除去に必要とされることを示し、機能する染色体領域はテロメアであることを示唆する。
TERT, TERCおよびDKC1を欠損させた細胞の紫外線感受性をサバイバルアッセイにて検討するといずれの場合も紫外線に対し感受性になることを見出している。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
これまで筆者が経験している研究手法による検討が多いため概ね順調に進んでいる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究の方向性として染色体のテロメア領域におけるCPD除去修復を詳細に検討すべきと考えている。これまでの研究からTERTのみならずテロメレース複合体がCPD除去を促進していることが示唆されるので、テロメレースにより修復されるCPDはテロメアに生じたCPDであることが予想されるからである。まずテロメアDNAを回収するためにテロメアリピートに相補的配列を持つオリゴDNAビーズを作成する。紫外線照射後のテロメア領域CPDを継時的に定量しテロメレースの関与を検討する。
|
| Causes of Carryover |
LC-MS解析を2021年度に行うことにしたため。
|
-
-
[Journal Article] Telomeres reforged with non-telomeric sequences in mouse embryonic stem cells.2021
Author(s)
1.Kim C, Sung S, Kim JS, Lee H, Jung Y, Shin S, Kim E, Seo JJ, Kim J, Kim D, Niida H, Kim VN, Park D, Lee J.
-
Journal Title
Nat Commun.
Volume: 12
Pages: 1097
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
[Journal Article] Substitution of Thr572 to Ala in mouse c-Myb attenuates progression of early erythroid differentiation.2020
Author(s)
3.Kitagawa K, Uchida C, Horiguchi R, Ohhata T, Sakai S, Niida H, Yasumoto S, Handa Y, Suzuki M, Hashimoto M, Tazawa T, Yokochi Y, Tsuji M, Kitagawa M.
-
Journal Title
Sci Rep.
Volume: 10
Pages: 14381
DOI
Peer Reviewed / Open Access
