2021 Fiscal Year Research-status Report
腫瘍浸潤リンパ球と腫瘍関連マクロファージに着目した肺癌細胞の進展メカニズムの解明
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20K07392
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
門田 球一 島根大学, 学術研究院医学・看護学系, 教授 (70448356)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 肺癌 / 進展 / 腫瘍免疫 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Tumor spread through air spaces (STAS) は肺癌細胞の肺胞腔内への高悪性度な進展形式として申請者らが提唱した（Kadota et al. J Thorac Oncol 2015）。STASを伴う肺癌は再発率が高く、予後因子としての重要性は多くの施設で確証され（Kadota et al. Am J Surg Pathol 2017, Am J Surg Pathol 2019）、WHO分類に記載された。しかし、STAS発生の生物学的メカニズムに関しては解明されていない。近年、進行期非小細胞肺癌ではがん免疫療法が発展し、特に抗PD-1抗体薬の有効性が示されている。PD-1とCD8陽性のTリンパ球浸潤は、抗PD-1抗体薬の効果を高めることが示されており(Thommen et al. Nat Med 2018)、バイオマーカーとして期待される。申請者らは、腫瘍の進展が腫瘍免疫により制御されていることを明らかにしてきた。FoxP3陽性制御性Tリンパ球の増加や腫瘍のIL-7R発現が、腫瘍促進性の免疫微小環境を形成し（Kadota et al. Oncoimmunology 2013, Chest2015, Suzuki, Kadota et al. J Clin Oncol 2013）、CD163陽性腫瘍関連マクロファージ／CD8陽性Tリンパ球比の増加が腫瘍の悪性度を高めることを解明した（Ujiie, Kadota el al. Oncoimmunology. 2015）。本研究課題では“STASの発生を促進する因子は何か”、“STAS発生の抑制には何か必要か”が学術的問いである。本研本研究ではSTASの発生機構の解明のため、腫瘍免疫微小環境に着目し、さらにSTASの存在が抗PD-1抗体薬の治療効果に与える影響を検討することを考えた。
現在までの研究実績としては、腫瘍関連マクロファージや上皮間葉転換が、肺癌に特異的な進展パターンの増加に関連することを明らかにした（Ikeda et al. Lung Cancer 2021, Yoshida et al. Lung Cancer 2021）。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
肺癌切除症例の臨床・病理データファイルの確立: 香川大学医学部附属病院で1999年～2015年の間に切除された約1200例の非小細胞肺癌症例を集め、患者転帰（生存、癌再発の有無、再発部位）を確認し、データの更新を行った。TNM病期は最新版のAJCC Cancer Staging Manual (8th ed. 2016)に基づき再分類をした。
病理組織学的評価：癌組織のパラフィンブロックや病理標本を収集し、STASや脈管浸潤の有無、腫瘍の浸潤度、組織型や亜型分類を判定した。
組織マイクロアレイの作成：癌組織の代表的な部位をマーキングし、組織マイクロアレイヤー（Tissue microprocessor KIN-2, Azumaya）を用いて、癌組織から3mmのコアを抜き、別のパラフィンブロックに整列させた（20コア/1ブロック）。組織マイクロアレイから4μmの薄切標本を作製した。
免疫細胞マーカーの免疫組織化学的染色：自動免疫染色装置（Ventana Benchmark System, USA）を用いて、汎Tリンパ球（CD3, CD5）、細胞傷害性Tリンパ球
（CD8）、ヘルパーTリンパ球（CD4）、制御性Tリンパ球（CD25, FoxP3）、汎Bリンパ球（CD20, CD79a）、前駆/ 胚中心Bリンパ球（CD10）、汎マクロファージ（CD68）、M2マクロファージ（CD163）の免疫染色を行った。
上記の免疫マーカーと肺癌の特異的な進展パターンの頻度を統計学的に解析し、一部のマーカーで有意な結果が得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
免疫細胞の計測数を中間値で2群に分けて、腫瘍の悪性度（患者の予後、腫瘍の大きさ、浸潤度、脈管浸潤、リンパ節転移）との関連性を統計学的に解明する。
統計学的に有意なマーカーに関しては、他のマーカーとの比率を求めるとともに、二重染色の結果から腫瘍免疫微小環境において特異性の高い免疫細胞の分布
が、腫瘍の悪性度に与える影響を明らかにする。
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| Causes of Carryover |
コロナ感染拡大の世界情勢により、国外の会社から購入予定であった試薬の購入が間に合わなかった。翌年度分として請求した助成金と合わせて、本年度に必要な染色試薬を購入する。
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Research Products
(1 results)
