Regulation of the subcellular localization of p62 and its relation to the physiological role

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K07421
• Research Institution: University of Tsukuba
• Principal Investigator: 蕨 栄治 筑波大学, 医学医療系, 講師 (70396612)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: p62

Outline of Annual Research Achievements

p62は見かけ上細胞質に局在しているように染色されるが、実質は核-細胞質間を常時行き来(シャ トリング)しているタン パク質である。
本研究では、p62の核―細胞質間シャトリングの仕組みと生理的意義を解明すること目的に、CRISPR/Cas9システムにより、核移行シグナル（NLS）、核外排出シグナル（NES）をそれぞれ欠失したp62遺伝子変異マウス（それぞれdNLS、dNESマウス）の作製を試みた。その結果、どちらも目的通りの変異を持つF0マウスを得ることに成功した。それぞれ、ヘテロ接合体の交配により、ホモ接合体を得ることができた。dNLSマウスは今年度の飼育期間において大きな外見上の変化は認められなかったが、dNESホモ接合体マウスは生後8週齢以内に全ての個体が死亡した。解剖および血液生化学検査の結果、離乳直後より重度の腎機能障害が引き起こされていることが示され、これにより死に至っていることが予想された。

Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

予想以上に順調にp62遺伝子変異マウスを作製することができたため。

Strategy for Future Research Activity

dNESホモ接合体マウスで起きる腎機能障害のメカニズムを解析する。ポドサイト障害が強く示唆されるため、これを組織学的に免疫染色、電子顕微鏡を用いて解析する。コントロールとして、Hetero、p62-KOを加え、これらの血液、尿の解析を追加していく。
dNLSマウスは、体重の増減に着目しながら、非アルコール性脂肪性肝炎誘発食を与え、生じる変化を野生型と比較していく。