2020 Fiscal Year Research-status Report
接着分子CADM1が基軸となる慢性腎臓病の尿細管間質病変形成
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20K07434
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
萩山 満 近畿大学, 医学部, 助教 (60632718)
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2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 尿細管間質病変 / 接着分子 / 細胞外断片 / ELISA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
慢性腎臓病では尿細管上皮変性・炎症細胞浸潤・間質線維化より成る尿細管間質病変が生じ、その重篤化が不可逆的な腎機能障害を導くと認識されているが、本病態の分子機序解明は十分ではない。
先行研究において、慢性腎臓病では尿細管上皮のIgCAM型接着分子CADM1（cell adhesion molecule 1）の細胞外切断（shedding）が亢進し、上皮アポトーシスが誘導されることを見出した。
本研究課題では、sheddingによって産生されるCADM1細胞外断片（CADM1-NTF）に注目する。CADM1濃度を測定するサンドイッチELISAを構築し、腎生検を行う慢性腎臓患者から採尿し、尿中に放出されるCADM1-NTFを測定した。慢性腎臓病患者（n=127）の平均値は1,727 pg/mLで、35%の患者において正常上限値（362 pg/mL）を越える濃度が検出された。また慢性腎臓病では尿中CADM1-NTF濃度が高ければ高い程、尿細管間質病変の重篤度と糸球体濾過率（GFR）とがより強く逆相関することを明らかにした。腎生検病理像との比較により尿中CADM1-NTFが慢性腎臓病尿細管間質病変のバイオマーカーとなる可能性を示した。
次にCADM1-NTFが尿中だけではなく尿細管間質にも浸出し、慢性炎症を惹起するトリガー分子になると仮説し、分泌型CADM1-NTFトランスジェニックマウス（β-actin及びCADM1プロモーターを使用）を作製した。ELISAでも使用したCADM1細胞外領域を認識する単クローン抗体を用いて、マウス腎組織のCADM1免疫染色を行ったところ、尿細管間質中に局在するCADM1-NTFが検出された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
慢性腎臓病において、尿細管間質病変の重篤度と糸球体濾過率（GFR）とが強く逆相関するほどの尿中CADM1-NTF濃度が高い患者の割合は思った以上に低かった。そのためサンプルが思うように集まっていない。しかし、分泌型CADM1-NTFトランスジェニックマウスが予定よりも早く作製することができ、尿細管間質中に局在するCADM1-NTFが検出されたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
尿中CADM1-NTF濃度が高い慢性腎臓病患者の腎組織を集め、CADM1免疫染色を行い、間質中のNTF量をスコア化する。同時にCADM1 shedding率（CTF/全長型比；ウエスタン法で算出）、尿細管上皮変性・アポトーシス（TUNEL・ssDNA免疫染色）、及び間質病変の重篤度を解析し、間質NTF量との相関性を解析する。また間質病変はリンパ球浸潤と線維化を病理学的にスコア化する。
トランスジェニックマウスでは、腎部分切除などを行い、機能糸球体数を減少させて慢性腎障害を引き起こし、間質NTFと尿細管間質病変の相関を解析する。
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| Causes of Carryover |
トミー社の遠心機本体（MDX-310）・ラックインローター（CA-300）ラック（AR015-24）一式を購入予定だったが、新型コロナの影響でメーカーに在庫がなく、次年度5月に変更になったため。
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