2022 Fiscal Year Annual Research Report

クリミア・コンゴ出血熱ウイルスモデル・ハザラウイルスを使用した持続感染機構の解明

Research Project

Project/Area Number	20K07528
Research Institution	Wakayama Medical University
Principal Investigator	西尾真智子和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (70156040)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	太田圭介和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (90625071) 松本祐介和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (00735912) [Withdrawn] 坂直樹和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (80867474)
Project Period (FY)	2020-04-01 – 2023-03-31
Keywords	ハザラウイルス / 持続感染細胞株 / リコンビナントウイルス
Outline of Annual Research Achievements	クリミア・コンゴ出血熱ウイルス（CCHFV)は致死性の高い人獣共通感染症の１つで、研究にはBSL4の施設が必要であり、研究をすることが難しい。そこで、CCHFVと近縁であるが、人には病気を起こさずBSL2の研究室で扱えるハザラウイルス（HAZV)をモデルウイルスとし、研究を進めている。HAZVをSW13細胞(ヒト由来）に感染させると、速やかにアポトーシスを伴う激しい細胞傷害性を示すが、細胞によってその程度は異なる。また、いくつかの細胞では持続感染細胞株を樹立することができた。樹立した細胞株の１つである持続感染HEK293細胞株は15代継代培養しても細胞中のN蛋白は一過性の感染と同等の発現がみられるにもかかわらず、上清中にウイルスが検出されないという驚くべき結果を得た。持続感染HEK293細胞株の全てのHAZV遺伝子を解析した結果、N蛋白には変異はなく、膜蛋白であるG蛋白に１アミノ酸変異、L蛋白に５アミノ酸変異が見つかった。まず、膜蛋白であるG蛋白の変異により、上清中にウイルスが出芽しなくなったのではないかと考えた。この変異を持ったリコンビナントウイルスを作製して感染実験を行ったが、wtと同様に上清中にウイルスは出芽していた。次に、L蛋白の５つのアミノ酸変異を持つリコンビナントウイルスを作製した。その結果、１番目の変異が最もcriticalであり、４番目の変異はウイルスの増殖を遅らせる変異であった。５つのアミノ酸変異がポリメラーゼ活性に与える影響は１番目の変異のみが活性を減少させたが、２番目から４番目の変異は増加させた。５番目の変異によるポリメラーゼ活性への影響はなかった。しかし、変異を持つリコンビナントウイルスを使用して持続感染を再現したところ、持続感染を引き起こすためにはL蛋白の５つのアミノ酸変異は必須であることが明らかになった。