2021 Fiscal Year Research-status Report
疾患病態を反映するマクロファージの免疫形態学的指標の探索
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20K07553
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
遠田 悦子 日本医科大学, 医学部, 助教 (00589327)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
寺島 裕也 東京理科大学, 研究推進機構生命医科学研究所, 講師 (90538729)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | マクロファージ / ケモカイン / FROUNT |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マクロファージはケモカインなどの遊走因子の刺激を受けて炎症・傷害組織に浸潤し、微小環境に応じて多様な性質を獲得して炎症・免疫応答の中核を担っている。ケモカイン受容体会合分子FROUNTはマクロファージの細胞遊走を促進し、がんや炎症性疾患の増悪化に関与する。研究代表者はこれまでにFROUNTを欠損したマクロファージやFROUNT阻害剤で処理したマクロファージは特有の形態を示すことを明らかにした。本研究ではマクロファージの機能と形態との相関を明らかにし、形態的特徴からマクロファージの機能や病態との関わりを推測する手法を探索することを目的とする。本年度は、ラットおよびマウスの骨髄細胞から調製した骨髄由来マクロファージに様々な炎症、分極化、細胞死誘導刺激（LPS、ケモカイン、IL-4、Fc受容体リガンド、LPS+ATP）を加え、刺激前後の形態、遺伝子発現の変化を解析した。FROUNT欠損マウス骨髄から調製したマクロファージ、および刺激前にFROUNT阻害剤を添加したマクロファージについて刺激応答性を解析し、各刺激に対するマクロファージの応答性におけるFROUNTの関与について検討を行った。それぞれの刺激に対する形態と、炎症性サイトカインを含む遺伝子発現の変化に関するデータを収集した。またラット腎炎モデルの腎組織凍結ブロック検体を用いて、マクロファージマーカーと糸球体係蹄を蛍光免疫染色により共染色し、毛細血管内のマクロファージの形態を可視化し、FROUNT阻害剤による影響を定量的に評価した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
炎症応答を想定した種々の刺激についてマクロファージの刺激応答性を検討し、FROUNT欠損やFROUNT阻害剤の処理による変化を見出した。これらの細胞レベルの解析に加えて、疾患モデル動物の組織におけるマクロファージ形態の解析を実施し、興味深い結果が得られ、おおむね計画通り進めることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
炎症応答を想定した各種刺激に対するマクロファージの刺激応答において、FROUNTの関与を示唆する興味深い結果が得られたことを受けて、各刺激受容体下流に共通してFROUNTが関与する経路について今後特定を進める。さらに次世代シークエンスによる網羅的遺伝子発現解析を実施し、細胞形態と遺伝子発現変動の関連について解析を進める。
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| Causes of Carryover |
マクロファージの刺激応答性の解析を同時に複数の刺激について並行して進めることにより効率よく実験を組むことができ、当初計画より消耗品費の使用が少なく済んだ。翌年度分として疾患モデルでの解析に活用する。
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