CD19発現型AdVとCD19 CAR-T細胞を組み合わせた遺伝子細胞治療戦略

2022 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K07679
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 吉田 秀樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10643546)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 柳生 茂希 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10572547) ; 菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (40453104)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 腫瘍溶解性アデノウイルス / CAR-T / CD19 / 横紋筋肉腫

Outline of Annual Research Achievements

【背景】近年血液腫瘍においてCD19を標的とするキメラ抗原受容体T（CAR-T）細胞療法の高い奏効率が報告されているが、固形腫瘍に対して十分な臨床効果を示した報告は未だない。本研究では腫瘍溶解性アデノウイルス（OAd）を遺伝子改変する技術と、CAR-T細胞療法開発技術を用いて、多彩な固形腫瘍に対して既存のCD19 CAR-T細胞による治療を可能とすることを目的とする。
【方法】
①CD19安定発現横紋筋肉腫細胞株（CD19-Rh30）の作製。②CD19-Rh30とCD19 CAR-Tの共培養。③CD19発現型-RMS特異的OAd(CD19-OAd)の開発。④CD19-OAdによる、CD19 CAR-Tの抗腫瘍効果の検証
【成果】
①CD19-RMSの作製:pcDNA3.1発現ベクターを用いてCD19を発現するRMS細胞株（Rh30）を作製した。またpuromycinにてセレクションを行い、フローサイトメトリーによりCD19が発現していること確認した。②CD19-Rh30とCD19 CAR-Tの共培養:CD19-Rh30および、野生型のRh30とCD19 CAR-Tを共培養し、real timeanalyzerでRh30に対する抗腫瘍効果の評価を試みた。系が中々安定しない状態が続いたが、CD19を組み込んだトランスポゾンプラスミドをエレクトロポレーション法でRh30に導入することで安定してCD19を発現するRh30を作成することに成功した。作成したCD19-Rh30とCD19 CAR-Tの共培養 (E:T= 1:1)したところ、CD19-Rh30は
Day 3のフローサイトメトリーで全滅した。一方野生型のRh30では同じ条件で全て生存していた。③CD19-OAdの開発は進行中である。