2022 Fiscal Year Research-status Report
核内低分子RNA snRNAU2関連断片の機能解明と肺癌予後マーカーとしての評価
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20K07791
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| Research Institution | Kyorin University |
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Principal Investigator |
相磯 聡子 杏林大学, 保健学部, 教授 (40195144)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大西 宏明 杏林大学, 医学部, 教授 (80291326)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Keywords | miR-1246 / RNU2-1 / コピー数多型 / バイオマーカー / 偽遺伝子 / 肺腺癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
snRNA U2遺伝子（RNU2-1）のコピー数多型解析法の改良：当遺伝子のコピー数多型は数～数十以上と非常に幅があるため、リアルタイムPCR法による比較定量キットでは正確な結果を得ることは困難で、絶対定量を行う必要があった。令和3年度はこの条件設定を行い健常人検体のコピー数解析を行ったが、この方法は煩雑で、誤差が生じやすかった。そのため令和4年度はデジタルPCR法を用いる方向で改めて条件検討を行い、健常者DNAについてデータを得た。リアルタイムPCR法を用いた場合とほぼ同じ結果であったが、得られたデータの信頼性は高くデータ取得に要する時間は大幅に短縮することができた。肺癌患者検体の収集は本学医学部付属病院において行うことを計画していたが、バイオバンクより提供を受けるため新たに倫理審査申請を行った。
snRNA断片の定量における交叉反応の可能性の解析：データベース情報によれば、miR-1246（snRNA U2断片）の塩基配列は少なくとも6種のsnRNA U2偽遺伝子に保存されている。本研究で注目しているpseudo U2断片（偽遺伝子RNU2-2Pに由来）の塩基配列については他には相同配列が見られないことが分かった。これは疾患マーカーとして有利な点である。
miR-1246 isoformに関する解析：既存の肺癌患者血清を用いた解析により、肺腺癌患者の血中miR-1246レベルの上昇は、miRBase型ではなく5’末端が2塩基短いisoformの上昇によるものであることを明らかにし報告した（Aiso T & Ueda M. Mol Med Rep 27:12979, 2023）。この成果はmiR-1246の標的遺伝子を理解する上で重要な情報を与える。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
新型コロナ感染症の拡大に伴い、①教育業務が増大し、研究時間確保が難しかったこと ②大学病院における肺癌患者検体収集が実施できなかったこと、が主な理由である。
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| Strategy for Future Research Activity |
コピー数解析の方法をリアルタイムPCR法からデジタルPCR法へ変更する。デジタルPCR装置は本学医学部共同研究施設の機器を使用する。またデジタルPCR用のキットを新たに購入する。肺癌患者検体については、文科省コホート・生体試料支援プラットフォームより提供を受けるための手続きを進めており、肺癌患者ゲノムDNAおよび癌組織と周辺の非がん部のDNAにおけるRNU2-1コピー数の解析、血清snRNA U2断片（miR-1246）およびpseudo U2断片の定量を行う予定である。
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| Causes of Carryover |
新型コロナ感染症の拡大に伴い、①教育業務が増大し、研究時間確保が難しかったこと ②大学病院における肺癌患者検体収集が実施できなかったこと、が主な理由である。コピー数解析の効率化を図るため、リアルタイムPCR法からデジタルPCR法へ変更する。そのためのキットを新たに購入する。検体はバイオバンクより提供を受けるため、それに伴う諸費用に使用する。
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Research Products
(1 results)
