2022 Fiscal Year Annual Research Report
分子異常フィブリノゲンの細胞外マトリックス機能に与える影響の評価と重要部位の同定
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20K07799
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
奥村 伸生 信州大学, 学術研究院保健学系, 特任教授 (60252110)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
樋口 由美子 信州大学, 学術研究院保健学系, 講師(特定雇用) (40757241)
平 千明 信州大学, 学術研究院保健学系, 助教 (40779310)
新井 慎平 信州大学, 学術研究院保健学系, 助教 (70866053)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | フィブリノゲン / 好中球 / NETｓ形成能 / M1-マクロファージ / THP-1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
フィブリノゲン(Fbg)の凝固・線溶系機能以外の炎症関連機能として、好中球のNETs形成能とマクロファージ(Mφ)分化能について研究を行った。
好中球のNETs形成能においては、ヒト精製好中球に終濃度5μMのA23187で刺激してNETsを誘導する系に市販Fbg（Merck社）を添加したところ、濃度依存的にNETs形成能の抑制が観察された。しかし、奥村研究室で精製したFbgを用いたところ、この抑制が認められなかった。Plasminogen(Plg)のコンタミの影響を疑いPlg-freeの市販Fbg(Enzyme Research Laboratories)を用いて再検討を行った結果、再度NETs形成能抑制が認められた。以上の結果より、市販Fbgにおいて観察されるNETs形成能抑制はコンタミしているPlg以外の物質による影響が考えられたため、初期の目的であった変異型FbgによるNETs形成能抑制実験は中止した。
マクロファージ(Mφ)分化能においては、急性単球性白血病由来の浮遊培養細胞THP-1を終濃度5μMのPMAで刺激して得たM0-Mφ（接着細胞）をかきとり、健常人およびFbg機能異常症患者の精製血漿Fbg 0.3mg/mLを添加したシャーレに24時間培養し、M1-あるいはM2-Mφ分化の影響を研究した。M1-Mφ分化の判定は、TNF-mRNA、M2-Mφ分化はCD206-mRNA発現量を定量RT-PCRで測定した。その結果、健常者Fbgにおいて増強したM1-Mφへの分化がBβGly15Cys-Fbgでは完全に抑制された。一方、AαArg16His-Fbg及びγArg275Cys-Fbgでは、抑制は観察されなかった。
以上の研究より、健常人FbgはM0-MφをM1-Mφに分化させる機能を有するが、一部の機能異常Fbgではその機能が著しく低下していることが明らかになった。
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