結核に対するシアリダーゼを用いた新規ナノ粒子ワクチンの開発

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 20K07800
• Research Institution: Hamamatsu University School of Medicine
• Principal Investigator: 榎本 紀之 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50436961)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須田 隆文 浜松医科大学, 医学部, 教授 (30291397) ; 永田 年 浜松医科大学, 医学部, 教授 (90275024)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: シアリダーゼ / ナノ粒子

Outline of Annual Research Achievements

卵白アルブミン(OVA)由来の細胞障害性T細胞(CTL) およびヘルパーT細胞(Th)エピトープを連結したハイブリッドエピトープ長鎖ペプチド(long epitope)を作成 し、シアル酸・Siglec-G・CD24複合体を分解しTLRシグナルを増強するシアリダーゼと共に、生分解性ナノ粒子(polylactic coglycolic acid: PLGA)と混合し た。これを骨髄由来の樹状細胞(BMDC)へパルスし、抗原特異的リンパ球(OT-I細胞、OT-II細胞)と共培養したところ、long epitope単独群と比較し、OT-I細胞 (CTL)、OT-II細胞(Th)の強い増殖能を確認した。以上の結果から、long epitope + PLGAによるワクチンは、シアリダーゼを添加することによりさらに強力なワ クチン療法となる可能性がある。しかし、実験を反復したが、有意差は認められなかった。また、シアリダーゼと、担体であるPLGAの相互作 用の問題が存在す る可能性もある。
そこで次に、脂質ナノ粒子(LNP)を担体としたワクチンの作成に着手した。今回、既に作成したlong epitopeをマイクロ流路を用いてLNPに内包したLNPナノ粒子 ワクチンの作成に成功した。マイクロ流路による混合時のpHなどを滴定し、long epitopeの十分な内包率を確認した。作成したLNPは、平均粒子径が156nm, 多分散指数0.099と粒子径も均一であ り, ζ電位+1.84mVとほぼ中性電荷のため細胞障害性はほぼ認めなかった。今後、このlong epitope/LNPナノ粒子ワクチンの免疫誘導能を検討する予定である。