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2020 Fiscal Year Research-status Report

Novel molecular screening system for thyroid embryologic genes

Research Project

Project/Area Number 20K08154
Research InstitutionUniversity of Yamanashi

Principal Investigator

矢ヶ崎 英晃  山梨大学, 大学院総合研究部, 講師 (00377540)

Project Period (FY) 2020-04-01 – 2024-03-31
Keywords先天性甲状腺機能低下症 / 遺伝子解析 / ジェノタイピング
Outline of Annual Research Achievements

先天性甲状腺機能低下症(CH)は約3,000出生に1名の頻度で認められ、単一遺伝子変異の発見率は約20%と低く、次世代シークエンサー(NGS)を用いても新たな疾患原因遺伝子が発見されることが少なくなってきている。NGS解析には解析対象の検体が揃うのに時間がかかること、効率がよくても1回あたりのコストが高いことの問題がある。
本研究では、新生児マススクリーニングにおいてCHと診断された児において、患者検体のリンパ球からg-DNAを採取し、甲状腺特異的なプライマーを使用したPCR法で増幅する。 一次スクリーニングではTSHR ; [ D403N, R450H, V473I, G498S ]、TG ; [C1264R ]、DUOX2 ; [ H678R ]、PAX8 ; [R31H, G23V]の部位をPCR法で増幅し、Sanger法によるシークエンスを行い疾患遺伝子の変異を同定する。
遺伝子スクリーニングで7/25例(28%)、NGSで20/25例(80%)に変異を同定した。CHの原因となるalleleを遺伝子スクリーニングで9allele、NGSで20allele同定した(網羅率45%) 。TSHRを同定した例で永続性CH (2/2例) 、DUOX2を同定した例で一過性CH (2/3例)を認めた。 遺伝子スクリーニングによるCHに関係する遺伝子の網羅率は1割程度だが、逆に疾患原因を構成するalleleの約45%を同定できた。
サンガーシーケンス法やPCRベースのジェノタイピングは、迅速でシンプルなワークフローであり、ある程度頻度の高い変異部位であれば迅速に検査結果を出すことができる。サンガー法により頻度の高い変異を最初に同定して、その後にNGS解析を行うことにより、コスト削減と新たな遺伝子変異の可能性を探ることができる。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

患者検体の収集は終了しており、解析を進めている。サンガーシークエンスによる解析はほぼ終了しており、次世代シークエンサーによる解析を行なって、最終的なジェノタイピングを進める段階に来ている。

Strategy for Future Research Activity

二次スクリーニングを進めていき、変異を同定されなかった症例でNGS解析を行う。NGSにおいて、甲状腺形成遺伝子のパネルを用いて、既知の変異および未知の変異を同定する予定である。 判明した疾患原因遺伝子と臨床像との関連を検討し、従来法とNGS、特定領域のみに限局した遺伝子スクリーニングの精度や費用対効果の比較を行う。

  • Research Products

    (3 results)

All 2021 2020

All Journal Article (1 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] A novel c.1391_1428delinsT mutation in TSHR as a cause of familial congenital hypothyroidism with delayed onset2021

    • Author(s)
      Watanabe Daisuke、Yagasaki Hideaki、Ishii Sayaka、Mitsui Yumiko、Nakane Takaya、Inukai Takeshi
    • Journal Title

      Pediatrics And Neonatology

      Volume: 61 Pages: 114~116

    • DOI

      10.1016/j.pedneo.2019.11.003

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] TSHR遺伝子に新規c.1391_1428delinsT変異を認めた、先天性甲状腺機能低下症家系2020

    • Author(s)
      渡邊 大輔、矢ヶ崎 英晃、成澤 宏宗、牧野 耕一、石井 佐綾香、三井 弓子、中根 貴弥、杉田 完爾
    • Organizer
      第121回日本小児科学会学術集会
  • [Presentation] 先天性甲状腺機能低下症における遺伝子解析スクリーニング2020

    • Author(s)
      渡邊大輔 成澤宏宗 矢ヶ崎英晃  牧野耕一 佐藤和正 佐野友昭 小林浩司 中根貴弥 太田正法 犬飼岳史
    • Organizer
      第52回日本小児内分泌学会学術集会

URL: 

Published: 2021-12-27  

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