川崎病原因究明への新たなアプローチ －レンサ球菌間の遺伝子水平伝播から迫る－

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 20K08189
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 鈴木 啓之 和歌山県立医科大学, 医学部, 博士研究員 (80196865)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武内 崇 和歌山県立医科大学, 医学部, 大学院研究生 (10246522) [Withdrawn] ; 土橋 智弥 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (20828488) ; 鈴木 崇之 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (40816691) ; 末永 智浩 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (70433365) ; 垣本 信幸 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (90614412)
• Project Period (FY): 2020-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 川崎病 / 病因 / レンサ球菌 / スーパー抗原遺伝子 / 遺伝子水平伝播

Outline of Annual Research Achievements

昨年度(令和2年4月～令和3年3月)に川崎病として入院した患児から咽頭・肛門ぬぐい液検体は32例得た。それらの検体から増菌培養してtotal DNAを抽出し、スーパー抗原のの一つであるSPE-G遺伝子断片の有無をPCRで検討した結果、32例中4例の増菌培養液からSPE-G遺伝子断片の陽性反応を得た。結果の信憑性を確保のために複数回のPCR反応を行い、陽性反応の再現性は確認できている。この4例の咽頭培養からGASは検出されないことは確認できており、増菌培養液中にはGASは存在せず、SPE-G遺伝子断片は、GAS以外のレンサ球菌由来と考えている。SPE-G遺伝子断片が陽性であった4例の増菌培養液はー80℃に凍結保存され、今年度、SPE-G遺伝子断片を保有する細菌種を同定する作業に用いた。
一方、令和3年4月～令和4年3月までに、新たに川崎病と診断されて入院した症例で咽頭培養を施行できた症例は12例であった。前年度と同様にSPE-Gの遺伝子断片について、PCRで検討した結果は、12例中4例に陽性反応を得た。前年度と合わせて44例中8例に陽性であった。
今年度、上記PCRでSPE-G遺伝子断片陽性であった8例中3例の増菌培養液中の細菌を、血液寒天培地に播き、SRE-G陽性菌の単クローン分離を行った、さらに、そのSPE-G遺伝子陽性の単クローン菌のDNAを用いて、次世代シークーエンサーで菌種同定作業を実施した。現段階では、まだ最終結論を記載する段階まで到達できていないが、Streptococcus X, Streptococcus Y, Staphylococcus Xの3菌種が候補となっている。さらに解析を進める予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

上記の細菌種同定作業は、かなり複雑で時間を要する作業であるが、進捗状況としてはおおむね想定範囲内である。

Strategy for Future Research Activity

現在進めている３菌種の、正確な菌種同定と、さらに今年度PCR陽性となっている咽頭菌の分離・細菌種同定へと進める予定である。

Causes of Carryover

研究は、ほぼ計画通りに進行しています。確かに少額の余剰金があり、次年度使用額が生じましたが、当然、令和4年度の研究を進める上でこの余剰金を使用し、研究を進めたいとと考えています。

Research Products

• [Journal Article] Intimal thickening and disruption of the media occur in the arterial walls of coronary arteries not associated with coronary arterial aneurysms in patients with Kawasaki disease. (2021)
  • Author(s): 2.Tsuchihashi T, Kakimoto N, Takeuchi T, Suenaga T, Suzuki T, Shibuta S, Ino Y, Kubo T, Akasaka T, Suzuki H.
  • Journal Title: BMC Cardiovasc Disord. Volume: 21(1):278. Pages: 1-8
  • DOI: 10.1186/s12872-021-02090-7.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] 川崎病急性期の冠動脈Z-scoreによる冠動脈病変発症予測の試み (2021)
  • Author(s): 1.鈴木 崇之、土橋 智弥、垣本 信幸、末永 智浩、 武内 崇、 渋田 昌一、 北野 尚美、 鈴木 啓之：
  • Organizer: 第124回 日本小児科学会学術集会
• [Presentation] A case of multisystem inflammatory syndrome in children (MIS-C) with venous dysfunction-like symptoms. (2021)
  • Author(s): Suenaga T, Murayama Y, Tsuchihashi T, Suzuki T, Kakimoto N, Takeuchi T, Suzuki H.
  • Organizer: 13th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Z-score is a possible predictor of the risk of coronary artery lesion development in patients with Kawasaki disease in Japan. (2021)
  • Author(s): Takayuki Suzuki, Nobuyuki Kakimoto, Tomoya Tsuchihashi, Tomohiro Suenaga, Takashi Takeuchi, Shoichi Shibuta, Naomi Kitano, Hiroyuki Suzuki.
  • Organizer: 3th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Discrepancy in risk factors between second-line treatment and developing coronary artery abnormalities among patients with Kawasaki disease in Japan. (2021)
  • Author(s): Naomi Kitano, Nobuhito Takekoshi, Takashi Takeuchi, Nobuyuki Kakimoto, Takayuki Suzuki, Tomoya Tsuchihashi, Shinya Tachibana, Shoichi Shibuta, Hiroyuki Suzuki, Tomohiro Suenaga, Wakayama Kawasaki disease Study (WKDS) group.uki,
  • Organizer: 13th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Intimal thickening and disruption of the media occur in the arterial walls of CA not associated with CAL in patients with KD. (2021)
  • Author(s): Tomoya Tsuchihashi, Nobuyuki Kakimoto, Takashi Takeuchi, Tomohiro Suenaga, Takayuki Suzuki, Hiroyuki Suzuki.
  • Organizer: 13th International Kawasaki Disease Symposium
  • Int'l Joint Research