2020 Fiscal Year Research-status Report
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20K08312
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
阿久津 典之 札幌医科大学, 医学部, 講師 (50531191)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 茂 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (10305229)
仲瀬 裕志 札幌医科大学, 医学部, 教授 (60362498)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 時計遺伝子 / 肝細胞癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. ヒト肝細胞癌における時計遺伝子発現の検討
肝細胞癌10症例の癌部および非癌部の組織よりRNAを作成しcDNAを合成。その後Comparative CT法を用いて相対的発現を解析した。Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を癌部と非癌部で解析したところ、Per1およびPer2が癌部と非癌部で有意な発現の違いをあることが分かった。背景因子での違いがないかさらなる検討を行っている。
2. 正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子発現と炎症性サイトカインに対する反応
肝癌細胞株HepG2, Hep3B, HLE, HLF, HuH7, PLC/PRF/5のcDNAを用いて、Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を解析し、細胞株間での発現に差があることがわかり、Per1やPer2の発現が低い細胞株と、高い細胞株を用いて、種々の炎症性サイトカイン(IL-1β, IL-4, IL-13, TNF-α, IFN-γ, IL-10, TGF-β)の添加を行い、RNAおよびタンパクを回収。時計遺伝子の変化を解析している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ヒト肝細胞癌における時計遺伝子発現は順調に解析できており、実験手技を確率できたと考えている。また、正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子発現とそれに関与するサイトカインついて検討し、結果が出てきており概ね順調に進んでいると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
肝癌細胞株 (HepG2, Hep3B, HLE, HLF, HuH7, PLC/PRF/5)に対し、レゴラフェニブ、レンバチニブを投与 し、各種時計遺伝子の発現についてqPCR法、western blotting法で解析する。さらにこれらの遺伝子制御 にかかわる転写因子について検討する。 続いて、C57/BL6Jマウスを12時間毎 の明暗群に分けて、分子標的薬を 明で投与する群と、暗で投与する群に分けて投与する。投与14 日後に、肝臓における時計遺伝子の発現をqPCR 法、western blotting法で評価する。
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| Causes of Carryover |
マウスを用いた実験まで進めなかったことが最大の理由と考える。C57/BL6Jマウスにおける概日時計の変化を検討する際に使用させて頂きたい。その際に新たに抗体試薬等の購入をさせて頂く予定である。
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