2021 Fiscal Year Research-status Report
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20K08312
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
阿久津 典之 札幌医科大学, 医学部, 講師 (50531191)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 茂 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (10305229)
仲瀬 裕志 札幌医科大学, 医学部, 教授 (60362498)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 時計遺伝子 / 肝細胞癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1. ヒト肝細胞癌における時計遺伝子発現の検討
肝細胞癌10症例の癌部および非癌部の組織よりRNAを作成しcDNAを合成。その後Comparative CT法を用いて相対的発現を解析した。Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を癌部と非癌部で解析したところ、Per1およびPer2が癌部と非癌部で有意な発現の違いをあることが分かった。背景因子での違いがないかさらなる検 討を行っている。
2. 正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子発現と炎症性サイトカインに対する反応
肝癌細胞株HepG2, Hep3B, HLE, HLF, HuH7, PLC/PRF/5のcDNAを用いて、Clock, Bmal1, Per1,Per2 Cry1の発現を解析し、細胞株間での発現に差があることがわ かり、Per1やPer2の発現が低い細胞株と、高い細胞株を用いて、種々の炎症性サイトカイン(IL-1β, IL-4, IL-13, TNF-α, IFN-γ, IL-10, TGF-β)の添加を行 い、RNAおよびタンパクを回収。時計遺伝子の変化を解析している。
3. 分子標的薬の正常肝細胞および肝癌細胞株における時計遺伝子の発現と炎症性サイトカインに対する反応
肝癌細胞株 (Hep3B, HLF, HuH7)にレンバチニブ1μMを投与 し、37°Cで48時間培養した後に、時計遺伝子Bmal1、Rev-erbα、Rev-erbβ、Per1、Per2、 Cry1の発現についてqPCR法、western blotting法を用い検討した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
細胞株実験は順調に進行できているが、マウス実験ができていないため遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
C57/BL6Jマウスを用い、抗癌剤投与の時間を変化し投 与することにより概日時計の変化を検討する。レンバチニブ10mg/kgを明で投与する群と、暗で投与する群に分けてチューブを用いて14日間経口投与し、肝臓における時計遺伝子の発現をqPCR 法、western blotting法で評価する。また、 マウスの大腸より腸内細菌を分離し、各群の腸内細菌叢プロファイルの変化に関して16S rRNA gene sequence法を用いて検討し、さらに腸内に存在する代謝物質動態について、メタ ボローム解析を行う。
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| Causes of Carryover |
今年度は、細胞株実験のみであり、マウス実験ができなかった。次年度はマウス実験を行いin vivoでの検討を行う。具体的にはC57/BL6Jマウスを用い、抗癌剤投与の時間を変化し投 与することにより概日時計の変化を検討する。レンバチニブ10mg/kgを明で投与する群と、暗で投与する群 に分けてチューブを用いて14日間経口投与し、肝臓における時計遺伝子の発現をqPCR 法、western blotting法で評価する。また、 マウスの大腸より腸内細菌を 分離し、各群の腸内細菌叢プロファイルの変化に関して16S rRNA gene sequence法を用いて検討し、さらに腸内に存在する代謝物質動態について、メタ ボロー ム解析を行う。
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