2022 Fiscal Year Research-status Report

肝疾患治療用細胞シートの液性因子に着目した新規肝硬変治療法の開発

Research Project

Project/Area Number	20K08331
Research Institution	Tottori University
Principal Investigator	板場則子鳥取大学, 医学部, 助教 (70457167)
Project Period (FY)	2020-04-01 – 2024-03-31
Keywords	肝硬変 / セクレトーム / MSC / 線維症
Outline of Annual Research Achievements	温度応答性培養皿上で間葉系幹細胞(MSC)にWnt/β-catenin経路阻害剤IC-2を添加し作製する肝疾患治療用細胞シートは、マウス肝表面へ移植した際に、IC-2未処理のMSCシートよりも強い線維化抑制効果を示す。この線維化抑制効果は、移植肝葉とは別の肝葉でも認められることから、細胞シートより産生される液性因子が肝線維化抑制効果に重要と考えられる。本研究では、肝線維化抑制作用を示す因子を同定し、その肝線維化抑制効果を肝硬変モデルマウスで検証し、Proof of Concept (POC)を確立することを目的とする。 IC-2処理MSCの濃縮培養上清からなるセクレトームを限外ろ過フィルターにより分画すると、約10－30kDaの分画が肝星細胞活性化抑制効果を示す。該当分画をさらにゲルろ過クロマトグラフィーにて50分画と細分画化し、肝星細胞活性化抑制効果を示す分画に含まれるタンパクを質量分析により解析したところ、上位20タンパクの中には、すでに線維分解酵素として知られているマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)-1が含まれていた。しかし、MMP-1のリコンビナントタンパクは肝星細胞の活性化を抑制しなかったことから、MMP-1以外のタンパクが肝星細胞活性化抑制効果を示すと推察される。一方、ラット腎線維芽細胞の上皮間葉転換(EMT)による腎線維症モデルのin vitro評価系では、約50－100kDaの分画がαSMAの発現抑制作用を示す。肝線維化抑制候補因子同様、ゲルろ過クロマトグラフィーにて50分画と細分画化し、腎線維化抑制作用を示す分画を選出した。質量分析を実施し、腎線維化抑制の本態となる分子の抽出を進める予定である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 4: Progress in research has been delayed. Reason 新型コロナウイルス感染症の感染拡大および戦況など複数の要因による消耗品の納期の遅れにより、実験計画に遅れが生じた。特に、本研究の遂行上に必須の消耗品となる限外ろ過フィルターの納期が数か月単位と大幅に遅れる事態が度々生じたことで、実験計画の進捗の遅れを挽回することが困難であった。補助事業期間を延長し、次年度にて予定の実験計画を終えることとする。
Strategy for Future Research Activity	候補因子の機能解析を引き続き実施する。並行して、ラット腎線維芽細胞の上皮間葉転換(EMT)による腎線維症モデルのin vitro評価系で線維化抑制効果を示す分画の質量分析を進める予定である。
Causes of Carryover	本研究の遂行上に必須の消耗品となる限外ろ過フィルターの納期が数か月単位で大幅に遅れたことが重なり、実験計画が遅れ、次年度使用額が生じた。補助事業期間を延長し、次年度にて予定の実験計画を終えることとする。