2021 Fiscal Year Research-status Report
TCF-4 isoform高精度発現解析による肝癌特異的Wntシグナル異常の探求
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20K08345
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
古賀 浩徳 久留米大学, 医学部, 教授 (90268855)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | TCF-4 / Wnt / isoform / variant |
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| Outline of Annual Research Achievements |
2020年度に引き続き，独自に構築したペプチド核酸(Peptide Nucleic Acids, PNA) ベースの特異的qPCRシステムの改良を行い，全14種中13種のTCF-4 isoforｍsの測定に成功した（TCF-4Mの測定系では，TCF-4Fも検出され，2者を判別することは不可能であった）．その結果，A, B, J, Kの測定においてみられた傾向が他のisoformsにおいても観察された．すなわち， 概ねWnt/beta-catenin/TCF-4経路のcanonical pathwayが活性化している癌(大腸癌や胃癌)とそうでない癌(肝癌や膵癌)とに分けることができる可能性が示唆された.さらに，起源がクローナルに同一であるとされる高分化型肝細胞癌株HAK-1Aと低分化型肝細胞癌株HAK-1Bでは，ほとんどTCF-4 isoformパターンが同じであることもわかった．このことは，TCF-4 isoformsは悪性化に伴って劇的に変化するのではなく，癌の起源臓器ないし組織のtraitを表していることが示唆された．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
すべてのTCF-4 variantsにおいて，type Mを除く13種のvariantsの測定法が確立でき，種々の細胞においてTCF-4 variantsの発現プロファイルを測定できるようになったから．
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの研究結果から，一部の癌細胞でvariantごとに発現のばらつきが見られたため，variantの過剰発現細胞を作成するに当たって，元来内在しているvariantの影響を最小限にすることが望ましいと考えられた．そのために，内在性のTCF-4をsh-RNAでノックダウンし，任意のTCF-4 variantを発現させることが可能なレンチウイルスベクターを作成することとした．今後のTCF-4 variant機能解析実験では，この発現系を用いたい．
また，主に外注で行っていたTCF-4 variants解析を，in houseの解析系で行えるよう準備を進めている．
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| Causes of Carryover |
依然として新型コロナウイルス感染が収まらず，結果として「旅費」において余剰金が発生したことと，予想以上に効率よくTCF-4 variantsの測定系ができたことが主な理由である．2022年度は，測定系のin house化を推進するために新規ベクター作成費が必要であり，繰越金を含めた当該年度予算を有用に使う予定である．
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